色譜法：是一種物理或物理化學(xué)分離方法。用于定性鑒別、純度檢查、含量測定。

分配系數(shù)：組分在固定相和流動相之間的分配平衡時的濃度之比。

第二節(jié) 薄層分析法

一般指吸附薄層色譜法，固定相為吸附劑的薄層吸附法。K值越大隨展開劑移動的速度越慢。

比移徝：在薄層色譜法中，組分的遷移距離（ ）與展開劑的遷移距離（ ）之比稱為比移值（ ） .

R 最佳范圍是0.3-0.5 ，可用范圍是0.2-0.8 .

吸附劑：吸附薄層色譜法的固定相。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 搜集整理常用吸附劑有：硅膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素和聚酰胺。

硅膠：在105-110 C加熱30分，使硅膠吸附力增加，稱為活化。具微酸性，適分離酸性中性物質(zhì)。

氧化鋁：堿性、中性、酸性。中性用得多。

制備薄層板：要求吸附劑涂布均勻表面光滑，使用前檢查均勻度。2000版用機械涂布法?；罨?。

吸附劑與展開劑的選擇：分離極性較強的組分時，宜選用活性低（活度級別高）的薄層板，以極性強的展開劑展開。反之

點樣：體積宜在20ul 以下，樣徑不超過2-3mm ，點間距離為1.5-2.0cm，距底2.0cm .

顯色方法：直接噴霧法、浸漬法、壓板法。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) //www.genyda.com

定性分析方法、純度檢查、定量分析方法（洗脫測定法和直接測定法）。

第三節(jié) 氣相色譜法

氣相色譜法：以氣體為流動相的色譜法稱為氣相色譜法。不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)分析。

原理：各組分在固定相與載氣（流動相）間分配系數(shù)不等，按大小依次被載氣帶出色譜柱，小先流出。

一、基本原理：

（一）基本概念：

一個組分的色譜峰用三項參數(shù)：峰高或峰面積（用于定量）、峰位（用保留值表示，用于定性）、峰寬（用于衡量柱效）。

（1）、保留時間 （tR） ：從進樣開始到某個組分的色譜峰頂點的時間間隔。

（2）、死時間 （t0）：分配系數(shù)為零的組分的保留時間。

（3）、相對保留值 （r）：兩組分的調(diào)整保留值之比。

（4）、半峰寬 （Wh/2）：峰高一半處的峰寬。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) //www.genyda.com

（二）塔板理論：

塔板理論方程式（高斯方程式）：

理論塔板式數(shù)： 理論塔板高度：

（三）速率理論： H=A+B/u+Cu

影響塔板高度的因素：醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理1、渦流擴散 2、縱向擴散 3、傳質(zhì)阻抗

二、氣相色譜儀：

（1）、色譜柱：固定相與柱管組成。 填充柱、毛細管柱； 分配柱、吸附柱

（2）、固定液：高沸點的液體，操作下為液態(tài)。 甲基硅油、聚乙二醇等

選擇原則：按相似性、按主要差別、按麥氏差別選擇。

（3）、載體：化學(xué)惰性的多孔性微粒

（4）、毛細管色譜柱：開管型、填充型

（5）、檢測器：

1、濃度型檢測器：熱導(dǎo)檢測器和電子捕獲檢測器

2、質(zhì)量型檢測器：氫焰離子化檢測器醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) //www.genyda.com

中國藥典2000對氣相色譜規(guī)定：除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意更改外，其他均可適當(dāng)改變，色譜圖于30min內(nèi)記錄完畢。

第4節(jié) 高效液相色譜法

一、 基本原理：影響柱效的主要因素是渦流擴散和傳質(zhì)阻抗。

分類：1、液固吸附色譜法：流動相為液體，固定相是固體吸附劑。

二、液—液分配色譜法：固定相幾乎全是化學(xué)鍵合硅膠，又稱化學(xué)鍵合相色譜法。

按固定相和流動相的極性2又分：正相色譜法和反相色譜法

正相色譜法：流動相極性小于固定相極性的色譜法。用于分離溶于有機溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì)，用于含有不同官能團物質(zhì)的分離。 極性弱組分先流出

反相色譜法：

三、 高效液相色譜儀：

1、高壓輸液泵

2、色譜柱

3、進樣閥

4、檢測器：紫外吸收檢測器、熒光檢測器、差示折光檢測器、電化學(xué)檢測

中國藥典2000對高效液相色譜法規(guī)定：除固定相種類、醫(yī)學(xué)教育、網(wǎng)搜集整理流動相組分、檢測器類型不得任意更改外，其余均可適當(dāng)改變，色譜圖于20min內(nèi)記錄完畢。

第5節(jié) 色譜系統(tǒng)適用性試驗和定量分析方法

一、系統(tǒng)適用性試驗

1、色譜柱的理論板數(shù)：

2、分離度：應(yīng)大于1.5

3、重復(fù)性醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) //www.genyda.com

3、拖尾聲因子：0.95-1.05之間

二、定量測定法：

1、內(nèi)標法加較正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量

2、外標法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量

3、加較正因子的主成分自身對照法

不加較正因子的主成分自身對照法醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) //www.genyda.com

第6節(jié) 電泳法

電泳法：在電場的作用下，依據(jù)各組分之間淌度的不同實現(xiàn)分離的方法。分離程度取決于淌度之差。

一、基本原理：

影響電泳分離的條件：1、緩沖液的PH值和離子強度 2、電場強度 3、樣品濃度

二、電泳儀：

三、 各類電泳法：

（1）紙電泳法

（2）醋酸纖維素電泳法：主要用于測定蛋白質(zhì)相對百分含量

（3）瓊脂糖凝膠電泳法：

（4）聚丙烯酰胺凝膠電泳法

（5）SDS聚丙烯胺凝膠電泳法：測定蛋白質(zhì)的分子量醫(yī)學(xué)教育。網(wǎng) //www.genyda.com

四、毛細管電泳法簡介：以彈性石英毛細管為分離通道，高壓直流電場為驅(qū)動力，依據(jù)樣品中各組分之間的淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的分析方法。