熒光物質(zhì)常見考點(diǎn)總結(jié)(內(nèi)附隨手練習(xí)題)
熒光物質(zhì)是檢驗(yàn)職稱考試會涉及的內(nèi)容,為了幫助檢驗(yàn)職稱考生了解,助力檢驗(yàn)職稱考生復(fù)習(xí),醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為大家整理如下:
【知識點(diǎn)名稱】熒光物質(zhì)
【進(jìn)階攻略】此知識點(diǎn)主要在《基礎(chǔ)知識》中考查,常以A1和B型題的形式出現(xiàn)。需熟練掌握各種熒光物質(zhì)的呈現(xiàn)顏色和吸收、發(fā)射波長。
【知識點(diǎn)詳情】
熒光物質(zhì)
(一)熒光色素 許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有:
1.異硫氰酸熒光素(FITC) 為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末,易溶于水或乙醇等溶劑。分子量為389.4kD,最大吸收光波長為490~495nm,最大發(fā)射光波長為520~530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。其主要優(yōu)點(diǎn)是:①人眼對黃綠色較為敏感;②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色熒光。
2.四乙基羅丹明(RB200) 為橘紅色粉末,不溶于水,易溶于乙醇和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定,可長期保存。最大吸收光波長為570nm,最大發(fā)射光波長為595~600nm,呈橘紅色熒光。
3.四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC) 最大吸引光波長為550nm,最大發(fā)射光波長為620nm,呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明,可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合,但熒光效率較低。
4.藻紅蛋白(R-RE) 本品為無定形,褐紅色粉末,不溶于水,易溶于乙醇和丙酮,性質(zhì)穩(wěn)定,可長期保存。最大吸引光波長為565nm,最大發(fā)射光波長為578nm,呈明亮的橙色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明,故被廣泛用于對比染色或用于兩種不同顏色的熒光抗體的雙重染色。
(二)其他熒光物質(zhì)
1.鑭系螯合物 某些三價稀土鑭系元素如銪(Eu3+)、鋱(Tb3+)、鈰(Ce3+)等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光,其中以Eu3+應(yīng)用最廣。Eu3+螯合物的激發(fā)光波長范圍寬,發(fā)射光波長范圍窄,熒光衰變時間長,最適合用于時間分辨熒光免疫測定。
2.酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì) 某些化合物本身無熒光效應(yīng),一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷,受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮,后者可發(fā)出熒光,激發(fā)光波長為360nm,發(fā)射光波長為450nm。其他如堿性磷酸酶的底物是4-甲基傘酮磷酸鹽,辣根過氧化物酶的底物是對羥基苯乙酸等。
【知識點(diǎn)隨手練】
一、單項(xiàng)選擇題
1.關(guān)于異硫氰酸熒光素的特點(diǎn),正確的是
A.橘紅色粉末
B.不溶于水
C.不溶于酒精
D.呈明亮的黃綠色熒光
E.熒光效率低
2.FITC的吸收波長為
A.495nm
B.520nm
C.570nm
D.450nm
E.360nm
3.在時間分辨熒光免疫測定中常用的熒光標(biāo)記物是
A.銪螯合物
B.鈉螯合物
C.鋅螯合物
D.銅螯合物
E.鎂螯合物
【知識點(diǎn)隨手練參考答案及解析】
一、單項(xiàng)選擇題
1.【答案及解析】D。異硫氰酸熒光素為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末,易溶于水或乙醇等溶劑。呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。其主要優(yōu)點(diǎn)是:①人眼對黃綠色較為敏感;②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色熒光。
2.【答案及解析】A。FITC的最大吸收波長為490~495nm。
3.【答案及解析】A。Eu3+螯合物的激發(fā)光波長范圍寬,發(fā)射光波長范圍窄,熒光衰變時間長,最適合用于時間分辨熒光免疫測定。
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