熒光抗體的鑒定有哪些?
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1.熒光素與蛋白質的結合比率 熒光素與蛋白的過量結合是非特異熒光著色的來源之一,而未結合者有抑制特異性熒光抗體反應的作用。
熒光素結合到蛋白上的量的重要指標是熒光素與蛋白質的結合比率(F/P)。比值越大,則抗體結合的熒光素越多,反之則結合越少。一般用于組織切片的熒光抗體,其F/P=1.5為宜,用于活細胞染色F/P=2.4為宜。
2.抗體效價 可以采用雙向免疫擴散試驗測定,抗原含量為1g/L時,抗體效價>1:16者較為理想。
3.抗體特異性 ①吸收試驗:向熒光抗體中加入過量相應抗原反應后,再用于陽性標本染色,應不出現(xiàn)明顯熒光;②抑制試驗:陽性標本先與相應未標記抗體反應,洗滌后,再加熒光抗體染色,熒光強度應受到明顯抑制。
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