氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法操作如何進(jìn)行呢？快來跟著小編了解一下吧！

（1）直接測(cè)定法

①加轉(zhuǎn)化液：試管內(nèi)加5ml　HiCN轉(zhuǎn)化液

②采血與轉(zhuǎn)化：取全血20μl，加到盛有轉(zhuǎn)化液的試管底部，用上清液反復(fù)沖洗吸管3次，充分混合，靜置5min。

③測(cè)定：以符合WH0標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計(jì)，波長540nm處，光徑（比色杯內(nèi)徑）1.000cm，HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸餾水調(diào)零，測(cè)定吸光度（A）。

④計(jì)算：根據(jù)樣本的吸光度（A）直接計(jì)算出血紅蛋白濃度（g/L）

（A為測(cè)定管吸光度，44為毫摩爾消光系數(shù)，64458/1000為1mol/L Hb溶液中所含Hb克數(shù)，251為稀釋倍數(shù)。）

（2）HiCN標(biāo)準(zhǔn)液比色法測(cè)定

HiCN參考液（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L），分別測(cè)得540nm處的吸光度，以參考液血紅蛋白含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或求出K值。

①標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和K值計(jì)算

②樣本吸光度（A）

③通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣本血紅蛋白濃度，或用K值計(jì)算，血紅蛋白濃度Hb（g/L）＝K×A。

注意事項(xiàng)

（1）標(biāo)本：異常血漿蛋白質(zhì)、高脂血癥、白細(xì)胞數(shù)超過30×109/L、脂滴等可產(chǎn)生濁度，干擾Hb測(cè)定。

（2）HiCN轉(zhuǎn)化液是一種低離子強(qiáng)度、pH近中性的溶液（7.2±0.2）。樣本中白細(xì)胞過高或球蛋白異常增高時(shí)，HiCN比色液會(huì)出現(xiàn)渾濁。

（3）HiCN貯存：轉(zhuǎn)化液貯存在棕色有塞玻璃瓶中，不能貯存在塑料瓶中，否則會(huì)使CN-丟失，測(cè)定結(jié)果偏低。HiCN轉(zhuǎn)化液在4℃保存一般可數(shù)月，不能在0℃以下保存，因?yàn)榻Y(jié)冰可使高鐵氰化鉀還原，試劑失效。

（4）氰化鉀試劑是劇毒品，測(cè)定后的廢液應(yīng)收集于廣口容器中，首先以水稀釋廢液（1:1），再按每升上述稀釋液加次氯酸鈉35ml，充分混勻，敞開容器，放置15h以上，使CN-氧化成C02和N2揮發(fā)，或水解成C032-和NH4＋，再排入下水道。廢液不能直接與酸性溶液混合，因?yàn)榍杌浻鏊峥僧a(chǎn)生劇毒的氰氫酸氣體。

2.十二烷基硫酸鈉血紅蛋白SDS測(cè)定法：

具有操作簡(jiǎn)單、呈色穩(wěn)定、準(zhǔn)確性和精確性符合要求、無公害等優(yōu)點(diǎn)。但由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認(rèn)，不能直接用吸光度計(jì)算Hb濃度，而且SDS試劑本身質(zhì)量差異較大，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

3.HiN3最大吸收峰542nm，顯色快，結(jié)果穩(wěn)定。

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