《臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)》第九章：酶免疫技術(shù)，跟著小編來(lái)學(xué)習(xí)一下吧！

【知識(shí)點(diǎn)名稱】酶免疫技術(shù)常用的底物

【進(jìn)階攻略】此知識(shí)點(diǎn)在考試大綱中屬于掌握內(nèi)容，常在《相關(guān)專業(yè)知識(shí)》中考查。

【知識(shí)點(diǎn)詳情】

1.HRP的底物　作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種：

（1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認(rèn)為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長(zhǎng)。OPD是ELISA中應(yīng)用最早的底物，但其應(yīng)用液穩(wěn)定性差，易變色，需新配制后在1小時(shí)內(nèi)使用，顯色反應(yīng)過(guò)程需避光，而且具有致癌性。

（2）四甲基聯(lián)苯胺（TMB）：TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長(zhǎng)為450nm。TMB具有穩(wěn)定性好，成色無(wú)需避光，無(wú)致突變作用等優(yōu)點(diǎn)，已成為目前ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。缺點(diǎn)是水溶性差。

（3）其他：5-氨基水楊酸（5-ASA）和2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）也是HRP常用的底物。

2.AP的底物　常用對(duì)-硝基苯磷酸脂（p-NPP），p-NPP經(jīng)AP作用后的產(chǎn)物為黃色對(duì)硝基酚，最大吸收峰波長(zhǎng)為405nm。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）的底物 常用4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU），酶作用后，生成高強(qiáng)度熒光物4-甲基傘形酮（4-MU），其敏度性較HRP高30～50倍，但測(cè)量時(shí)需用熒光計(jì)。

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