免疫印跡法的檢測原理是檢驗職稱考試需要掌握的內容，醫(yī)學教育網小編為大家搜集整理如下，希望可以幫助大家復習掌握。

免疫印跡法是在蛋白質電泳分離和抗原抗體檢測的基礎上發(fā)展起來的一項檢測蛋白質的技術，它將SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的高分辨力與抗原抗體反應的高特異性相結合。

第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白樣品經SDS處理后帶負電荷，在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動，分子量越小，泳動速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶)。

第二階段為電轉移。此階段分離的蛋白質條帶肉眼仍不可見。

第三階段為酶免疫定位。將印有蛋白質條帶的硝酸纖維素膜(相當于包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標第二抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的酶反應底物，使區(qū)帶染色醫(yī)學|教育網整理。常用的HRP底物為3，3-二氨基聯苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍紫色)。陽性反應的條帶清晰可辨。并可根據SDS-PAGE時加入的分子量標準，確定各組分的分子量。

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