測定酶活性濃度的兩大類方法分別是什么呢?
測定酶活性濃度的兩大類方法分別是什么呢?跟著小編來學習一下吧!
1.固定時間法(取樣法、終點法、兩點法)
先讓酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間,然后停止酶反應(yīng),加入試劑進入化學反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。
用這類方法測酶活性濃度,必須保證酶和底物在所選定的溫度下作用時間要很精確,否則將引起較大誤差。
該法最基本的一點是停止反應(yīng)后才測定底物或產(chǎn)物的變化。
2.連續(xù)監(jiān)測法(速率法)
連續(xù)監(jiān)測法具有測定準確等眾多的優(yōu)點,隨著科學技術(shù)的發(fā)展,自動生化儀的使用,正在逐步取代“固定時間法”。實際工作中,測酶活性濃度常用酶偶聯(lián)法。
最簡單的酶偶聯(lián)反應(yīng)為以下模式:
A:底物
B:待測酶產(chǎn)物(不能直接測定)
C:指示酶產(chǎn)物(可以直接測定)
Ex:待測酶
Ei:指示酶
如果一些酶反應(yīng)找不到合適的指示酶與其直接偶聯(lián),可以加入另一種酶,將兩者連接起來,模式如下:
酶偶聯(lián)反應(yīng)與一般酶反應(yīng)的一個重要區(qū)別是有一個明顯的延滯期。從酶反應(yīng)開始至穩(wěn)態(tài)期間,指示酶反應(yīng)較慢且不穩(wěn)定,稱為延滯期。
反應(yīng)體系中不應(yīng)有中間產(chǎn)物堆積,否則將導致誤差。
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