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標本的分析過程

2019-08-20 09:41 來源:
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醫(yī)學教育網小編匯總整理了標本的分析過程如下,供大家參考復習。

1.方法的選擇和評價:實驗室要想把質量放在首位,首先要選用一個可靠的檢測方法,即有一定精密度和準確度的京城同一項目眾多的方法中,應詳細查閱文獻,了解該項測定的方法學發(fā)展史,收集文獻中對各種方法的評價。要注意各家報告中的差異。經過綜合判斷,結合本實驗富強的具體條件初選出幾個方法供選擇。方法的可靠性要用實驗來評估,還要經過一段實際試用期復驗,并參照臨床的充許誤差要求,判斷這些特性引入誤差的可接受性。

(1)精密度:即重復性試驗,一般取幾個有臨床診斷意義的標本進行多次重復測定。可分批內和批間重復性,其標準差的大小反映該法要這個均值下的不精密度,常用隨機誤差表示。通常高濃度隨機誤差小而低濃度反之。批內重復性的變異系數要比批間小些。一個精密度較差的方法不可能獲得正確的結果。

(2)靈敏度:是測定方法對檢測分析濃度增量的能力。它和方法的精密度有關。例如某血細胞分析儀測定紅細胞X=5.0×1012/L,s=0.1×1012/L.。其95%的可能性為X±1.96s.如果只作一次測定,其最低值可為4.8×1012/L,最高值為5.2×1012/L.所以一次測定有能肯定期5 .2×1012/L的結果一定比4.8×1012/L高。按正態(tài)分布,測定值如在X±2.58s以外的可能性僅1%,因此該法的分析靈敏度是在這個濃度下重復測定標準差的2.58倍。

檢測限度是實驗的方法對最小分析量的檢測能力,也是分析靈敏度的一種指標。例如聯苯胺法對標準知紅蛋白最小檢出理為2mg/L.而愈創(chuàng)木酯法約為10mg/L,顯然聯苯胺法檢測糞便隱血敏感得多。

(3)分析范圍:是指使用該法可以測定到準確結果的濃度范圍軻從標準曲線來估計,但要注意介質將近應。例如尿蛋白定量測定中麗春紅S法線性范圍較窄(0-1.0g/L),而鄰苯三酚紅鉬法線性范圍相比之下較寬(0-2.0g/L)。

(4)特異性:測定方法最好只能檢測某專一分析物,而對非分析物檢測不出來。例如尿試帶采用葡萄糖氧化酶法特異性較高,如用班氏法測尿糖,則除葡萄糖以外其它還原性物質均可呈假陽性反應,正因其特異性差,現已逐漸淘汰。同樣用免疫法檢測糞便中血紅蛋白比化學法的特異性高。

(5)是由于存在于標本或試劑中的其它物質干擾了該法的反應。例如病人服用的維生素C達到一定血濃度可干擾葡萄糖氧化酶過氧化物酶法,使血糖偏低,排泄一尿中可干擾尿試帶測定尿糖和隱血。常見的干擾物質有脂肪、蛋白質、血紅蛋白、膽紅素、藥物、抗凝劑、防腐劑等。其帶來的誤差屬恒定誤差(conatant sysrematicerror,CE)。

(6)介質效應:分析標本中除了分析物以外的所有其它組分稱介質。介質將近應是批分析方法對分析物測定時,介質參與反應的影響,它可以是加強反應,也可以抑制反應。從方法學來講介質將近應并不是干擾。例如尿液質控物如用尿液為基質配制,或用水來配制,其效果稍有差異,以前者為好。生化測定中不少磁針準液是用白蛋白或血清配制,可使其介質將近應與待測標本相似。

(7)回收試驗:回收是將分析物定量加入被測標本中,人析所用方法對加入增量的實際檢出能力。用回收率表示?;厥章试浇咏?00%越好。其誤差比例誤差(proportional systematicerror,PE),也是系統誤差(systematic analytical error,SE)之一。

(8)準確性估計:方法學對準確性的評估實際上是對該分析方法在使用測定結果可能具有不準確的估計??捎门c公認的參考方法,一起測定40-200例標本,標本內分析濃度包括各種相關的疾病可能具有的濃度值,可用配對t檢驗,這種t檢驗只能說明兩法均數處有無系統誤差,并不說明其它濃度處兩法比較情況,更不說明系統誤差大小,另一種統計方法是直線回歸,用y=bx+a表示。式中截距a反映恒定誤差,斜率b和1的差(b-1 )反映方法比較的比例誤差。回歸直線標準差sy/x是方法間隨機誤差的估計值。

(9)交叉污染:血細胞分析儀由于測定不同濃度樣品或者流動經色池對依次呈色液進行比色,都可能發(fā)生交叉污染。為了了解分析過程中交叉污染程度,可先測高值樣品3次,隨即測定低值3次。然后按下列公式計算。目前已達到小于1%水平。

互染率(%)= L1-L3/H3-L3×100

(10)總誤差概念:在常規(guī)測定中每個標本測定結果均有誤差,這個誤差包括了對方法學評價時的各種類型的隨機誤差和系統誤差,因此測定結果與真值的差異是隨機誤差和系統誤差的總和,即誤差。也可用TE=1.96s+(bxc+a) -xc表示(xc為標本某一濃度)??傉`差必須在必須可接受的低水平范圍內,這種檢測方法才能用于常規(guī)檢查。

試劑的穩(wěn)定性也應屬方法學的可靠性范疇。理想的試劑能在室溫保存一年以上,現在不少采用冷凍干燥粉劑或液體試劑密閉保存在冰箱中,有效期也較長??捎帽4娌煌瑫r間的試劑對比。或通過在不同溫度下的破壞性試驗來核實試劑的保存期。

方法學評價中還應考慮其實用性包括該法對儀器設備的要求;標本預處理要求;該法處理批量標本的速度;對操作人員來務水平的要求;對有效期控制的要求;試劑來源和保存條件;對環(huán)境有無污染和污物如何處理等,這些可從文獻中了解,也可通過方法學詩人的實驗過程中認識和總結。另外還應考慮經濟效益,可從該法成本進行經濟效益分析,但還要考慮病人的承受能力,兩者必須兼顧。

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