標(biāo)本的樣品預(yù)處理是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技士/技師/主管技師考試復(fù)習(xí)需要了解的生化檢驗(yàn)知識(shí)，醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)內(nèi)容與考生分享，希望給予大家?guī)椭?

TDM工作中，除少數(shù)方法可直接應(yīng)用收集的標(biāo)本供測(cè)定外，大多需進(jìn)行必要的預(yù)處理。預(yù)處理的目的是在不破壞欲測(cè)定藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)的前提下，用適當(dāng)?shù)姆椒ūM量減少干擾組分，濃縮純化待測(cè)物，以提高檢測(cè)的靈敏度及特異性，并減少對(duì)儀器的損害。預(yù)處理包括去蛋白、提取和化學(xué)衍生化。

（一）去蛋白

TDM常用的血清（漿）、唾液或尿液等都或多或少地含有蛋白質(zhì)，并對(duì)多種測(cè)定方法構(gòu)成干擾，還可造成儀器污染、損害。去蛋白的方法有沉淀離心法、層析法、超濾法和超速離心法等。其中以沉淀離心法最為簡(jiǎn)便快捷，并且結(jié)合提取的要求，選用合適的酸、堿和有機(jī)溶劑，與提取同步進(jìn)行，故最常選用。由于藥物和血漿蛋白的結(jié)合，大多是通過離子鍵、氫鍵、VanderWaals引力等較弱的作用力形成。當(dāng)使蛋白質(zhì)變性沉淀時(shí)，這種結(jié)合也同時(shí)被破壞，釋放出藥物，因此用沉淀離心法去蛋白處理的體液標(biāo)本，最后測(cè)得的藥物濃度應(yīng)是包括游離藥物和與蛋白結(jié)合的藥物兩部分的總濃度。顯然，若需要單獨(dú)測(cè)定游離藥物濃度時(shí)，不能采用此法，而應(yīng)選用溫和但較繁雜、耗時(shí)的層析法、超濾法或超速離心法。這樣既可去除蛋白，又不至使蛋白結(jié)合的藥物釋出。

（二）提取

為了盡可能選擇性地濃縮待測(cè)組分，以提高檢測(cè)的靈敏度，并改善檢測(cè)方法的特異性，減少干擾，除免疫化學(xué)法外，TDM使用的多數(shù)檢測(cè)方法均需進(jìn)行提取。提取方法有液-液提取和液-固提取兩種。

⒈液-液提取由于大多數(shù)藥物都是有機(jī)化合物，并有不少為弱酸、弱堿。它們?cè)趐H不同的溶液中，將發(fā)生程度不等的解離。因此，應(yīng)選用對(duì)待測(cè)物溶解度高、與所用標(biāo)本不相混溶也不發(fā)生乳化的有機(jī)溶劑，并根據(jù)待測(cè)物的酸堿性和pKa，酸化或堿化樣本，使待測(cè)物盡可能多地以脂溶性高的分子態(tài)存在，從而主要分配到有機(jī)溶劑中。這樣處理，可使在此條件下極性高的干擾成分被排除。離心分離有機(jī)相和水相（樣本），即可達(dá)到提取的目的。若必要，可按上述原理將待測(cè)成分再轉(zhuǎn)提到pH適當(dāng)?shù)乃嘀校M(jìn)一步排除高脂溶性的干擾物質(zhì)。這類方法由于樣本和提取介質(zhì)均為液相，故稱液-液提取。

⒉液-固提取又稱固相柱提取，是近年發(fā)展的一種提取方法。可根據(jù)待測(cè)物的理化性質(zhì)選用一合適的常壓短色譜柱，TDM中常用疏水性填料柱。待標(biāo)本（多經(jīng)去蛋白處理）通過該柱后醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理，以適當(dāng)強(qiáng)度的溶劑洗脫，選擇性收集含待測(cè)組分的洗脫液部分，即可達(dá)到較理想的提取目的。也可用強(qiáng)度不同的溶劑分次洗脫，僅收集洗脫待測(cè)組分。此類提取柱已有數(shù)種商品化生產(chǎn)，可供選用。本法雖比液-液提取繁瑣，但回收率及提取特異性均高是其優(yōu)點(diǎn)。

（三）化學(xué)衍生化反應(yīng)

用光譜法和色譜法檢測(cè)藥物時(shí)，可根據(jù)待測(cè)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和檢測(cè)方法的要求，通過化學(xué)衍生化反應(yīng)，特異性地引入顯色（可見光分光法）、發(fā)光（紫外、熒光、磷光）基團(tuán)，提高檢測(cè)的靈敏度和特異性。氣相層析時(shí)，常需使待測(cè)物硅烷化、烷化、鹵化和?；?，以增加待測(cè)物的熱穩(wěn)定性和揮發(fā)性，改善分離效果和適用于特殊的檢測(cè)器。用高效液相色譜柱前衍生化分離測(cè)定手性異構(gòu)體藥物，則需在待測(cè)物中引入手性拆分基團(tuán)。