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病原檢查
1.直接鏡檢
取患者血液、骨髓或腦脊液、胸腹水、痰液、支氣管肺泡灌洗液、眼房水、羊水等作涂片,或淋巴結(jié)、肌肉、肝、胎盤等活組織切片,作瑞氏或姬氏染色鏡檢可找到滋養(yǎng)體或包囊,但陽性率不高。亦可作直接免疫熒光法檢查組織內(nèi)弓形蟲。
2.動物接種或組織培養(yǎng)
取待檢體液或組織懸液,接種小白鼠腹腔內(nèi),可產(chǎn)生感染并找到病原體,第一代接種陰性時(shí),應(yīng)盲目傳代3次?;蜃鹘M織(猴腎或豬腎細(xì)胞)培養(yǎng)以分離、鑒定弓形蟲。
3.DNA雜交技術(shù)
國內(nèi)學(xué)者首次應(yīng)用32P標(biāo)記含弓形蟲特異DNA序列的探針,與患者外周血內(nèi)細(xì)胞或組織DNA進(jìn)行分子雜交,顯示特異性雜交條帶或斑點(diǎn)為陽性反應(yīng)。特異性和敏感性均高。此外,國內(nèi)亦已建立多聚酶鏈反應(yīng)診斷本病,并與探針雜交、動物接種和免疫學(xué)檢查方法相比較,顯示春具高度特異、敏感和快速等優(yōu)點(diǎn)。
免疫學(xué)檢查
1.檢測抗體
所用抗原主要有速殖子可溶性抗原(胞質(zhì)抗原)和胞膜抗原。前者的抗體出現(xiàn)較早(用染色試驗(yàn)、間接免疫熒光試驗(yàn)檢測)、而后者的抗體出現(xiàn)較晚(用間接血凝試驗(yàn)等檢測)。同時(shí)采用多種方法檢測可起互補(bǔ)作用而提高檢出率。由于弓形蟲在人體細(xì)胞內(nèi)可長期存在,故檢測抗體一般難以區(qū)別現(xiàn)癥感染或以往感染,可根據(jù)抗體滴度的高低以及其動力學(xué)變化加以判斷。常用的檢測方法有:
(1)染色試驗(yàn)(Sabin-FeldmanDT):檢測IgG抗體。感染后1~2周出現(xiàn)陽性,3~5周抗體效價(jià)達(dá)高峰,以后逐漸下降,可維持多年。抗體效價(jià)1∶陽性提示為隱性感染;1∶256為活動性感染1∶1024為急性感染。其缺點(diǎn)為需要活蟲進(jìn)行操作醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。
(2)間接熒光抗體試驗(yàn)(IFAT):檢測IgM和IgG抗體。具靈敏、特異、快速、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),與DT基本一致。但如有類風(fēng)濕因子、抗核抗體陽性時(shí),可引起假陽性反應(yīng)。血清抗體效價(jià)1∶64為既往感染,余同DT.
(3)間接血凝試驗(yàn)(IHA):試驗(yàn)方法簡便。與DT結(jié)果符合率高。但一般在病后一個(gè)月左右出現(xiàn)陽性。結(jié)果判斷同IFAT.重復(fù)性差和致敏紅細(xì)胞不穩(wěn)定與其缺點(diǎn)。
(4)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):可檢查IgM與IgG抗體。并有靈每度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。也可用于抗原鑒定。近年來在ELISA的基礎(chǔ)上又創(chuàng)建、衍生了多種新新的測定方法,如金葡萄A蛋白(SPA)-ELISA;辣根過氧化物酶標(biāo)記SPA取代酶標(biāo)第二抗體進(jìn)行ELISA檢測(PPA-ELISA);親和素-生物素(ABG)ELISA;凝膠擴(kuò)散(DIG)-ELISA;斑點(diǎn)(DDT)-ELISA以及單克隆抗體(McAb)-ELISA等更靈敏、更特異的方法。
(5)放射免疫試驗(yàn)(RIA):具有高度敏感性和特異性。
2.檢測抗原
系用免疫學(xué)方法檢測宿主細(xì)胞內(nèi)的病原(速殖子或包囊)、在血清及體液中的代謝或裂解產(chǎn)物(循環(huán)抗原)。是早期診斷和確診的可靠方法。國內(nèi)外學(xué)者建立了McAb-ELISA以及McAb與多抗的夾心型ELISA法檢測急性患者血清循環(huán)抗原,其敏感度為能檢出血清中0.4μg/ml的抗原。
皮內(nèi)試驗(yàn)
以受染小白鼠腹腔液或雞胚液作抗原。常出現(xiàn)延遲性、結(jié)核菌素反應(yīng)??捎米髁餍胁W(xué)調(diào)查。目前應(yīng)用不多。
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