血小板基因結(jié)構(gòu)和基因分型是檢驗技士需要了解的知識，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜索整理如下：

一、血小板特異性抗原的等位基因結(jié)構(gòu)和血小板糖蛋白復(fù)合物多態(tài)性血小板膜上具有多態(tài)性的血小板糖蛋白復(fù)合物是血小板特異性抗原的載體，至少5個膜糖蛋白：GPIa，Ib（α和β），IIb，IIIa和CD109是多態(tài)性，攜帶著HPA同種特異性抗原。大多數(shù)攜帶特異性抗原的糖蛋白是二聚體復(fù)合物，由兩個不同的糖蛋白分子配對組成，如GPIa/IIa，IIb/IVa或Ib/IX糖蛋白復(fù)合物，只有CD109是單體結(jié)構(gòu)，CD109上的HPA-15a，HPA-15b抗原都有相當高的頻率。血小板特異性抗原在糖蛋白上的位置，所在的染色體，以及編碼的等位基因，形成多態(tài)性的DNA上堿基對的替換和造成相應(yīng)氨基酸的改變，詳見表1血小板特異性抗原（HPA）基因資料。

表1 血小板特異性抗原（HPA）基因資料

二、HPA基因分型方法對HPA表型分型，由于難以獲得高質(zhì)量，特異性的HPA抗血清，而且目前用于的HPA分型的可靠血清學(xué)試劑比較稀有，所以很難系統(tǒng)確定HPA表型型別。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，目前對HPA的分型主要是進行基因分型，基因分型技術(shù)成熟，廣泛被各實驗室運用于基因型別的篩查和建立已知HPA基因型的血小板供者庫，以下是當前比較多使用和探討的基因分型方法；

1、聚合酶鏈式反應(yīng)序列特異引物分型技術(shù)（PCR-SSP）：1993年，Metcalfe等首次運用序列特異性引物PCR成功地對HPA-1進行分型。PCR-SSP的原理：設(shè)計特異性引物，利用引物3‘端的特異性，直接擴增相應(yīng)的HPA片段，PCR產(chǎn)物凝膠電泳以后，以紫外線透射來檢測，DNA條帶的存在或缺失即可確定基因型。特點：PCR-SSP操作比較簡單，耗時較少，適合小批量標本，是目前HPA基因定型中最常用的一種技術(shù)。

2、實時定量PCR原理：在PCR指數(shù)擴增期間，利用連續(xù)檢測熒光信號的強弱來即時測定特異性產(chǎn)物的量，并據(jù)此推斷目的基因的初始量。它廣泛應(yīng)用于定量檢測mRNA表達水平，其特點是易操作、高通量、敏感性高和特異性強。最近，F(xiàn)icko等運用實時定量PCR技術(shù)分析了血小板糖蛋白GP-Ⅲa基因的表達。

TaqMan技術(shù)是美國PerkinElmer公司研制的一種實時PCR技術(shù)，它利用了Taq多聚酶的核酸酶活性。Taq酶在引物延伸過程中，特異性移去雜交的探針，利用其5‘核苷酶活性將探針啟開，釋放出指示熒光染料，指示染料的熒光強度隨著每一個擴增循環(huán)而增加。這一方法成功運用于HPA-1、HPA-2和-3基因定型。

3、基因芯片技術(shù)（DNAmicroarray）

利用正向雜交的方法，制成針對HPA基因SNP位點的DNA芯片；用熒光標記的HPA型特異性探針分別于芯片進行雜交，用軟件分析樣品的雜交結(jié)果，從而確定樣品的HPA基因型。此技術(shù)特點是一次性可同時檢測大量樣品、快速、準確。近來，Brès等用基因芯片對HPA-1等位基因系統(tǒng)分型，證明此方法適用于HPA基因分型。

4、限制性片段長度多態(tài)性分析（PCR-RFLP）原理是限制性內(nèi)切酶能夠識別DNA序列上的特異性位點，并切割產(chǎn)生一定長度的DNA片段。相應(yīng)基因片段用含SNP區(qū)域的引物進行擴增，擴增產(chǎn)物進行聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳，最后在紫外線下進行DNA片段的帶型分析。該法特點是RFLP是利用限制性內(nèi)切酶酶解相應(yīng)位點口增產(chǎn)物，不需探針雜交，但被測的HPA基因需有合適的限制性酶切位點。

5、聚合酶鏈式反應(yīng)—等位基因（序列）特異性寡核苷酸雜交（PCR-ASO）該方法用PCR擴增SNP的基因序列，擴增產(chǎn)物連接到尼龍膜支持物上，再與標記的等位基因特異性的指示物—寡核苷酸探針雜交。該方法特點是以雜交為基礎(chǔ)的檢測技術(shù)，但需嚴格控制雜交條件和設(shè)置標準對照避免假陽性和假陰性。

6、同源雙鏈優(yōu)先形成試驗（PCR-PHFA）原理：雙標記擴增產(chǎn)物（標準雙聯(lián)DNA，它的兩條鏈分別被生物素和鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）標記與未標記的待測DNA雙鏈之間雜交時的競爭。該方法特點：不需要電泳，可用軟件進行結(jié)果判讀。

7、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（PCR-SSCP）其原理是單鏈DNA在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移率與其分子大小和三級構(gòu)象有關(guān)，依次來檢測基因突變和多態(tài)性。

8、血小板基因序列檢測方法（HPA-SBT）原理：通過對DNA堿基序列的檢測和比對，進行血小板基因分型和鑒定，是最有價值的血小板基因分型方法之一。