為提高抗原和抗體檢測的敏感性，將已知抗體或抗原標(biāo)記上易顯示的物質(zhì)，通過檢測標(biāo)記物，反映有無抗原抗體反應(yīng)，從而間接測出微量的抗原或抗體。常用的標(biāo)記物有酶、熒光素、放射性同位素、膠體金及電子致密物質(zhì)等。這種抗原或抗體標(biāo)記上顯示物所進(jìn)行的特異性反應(yīng)稱為免疫標(biāo)記技術(shù)(immunolabelling technique)。

　　免疫標(biāo)記不僅大大提高了試驗(yàn)敏感性，若與光鏡或電鏡技術(shù)相結(jié)合，能對組織或細(xì)胞內(nèi)的待測物質(zhì)作精確定位，從而為基礎(chǔ)與臨床醫(yī)學(xué)研究及診斷提供方便。免疫標(biāo)記技術(shù)大致分為兩大類：一類屬于免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemical technique)，用于組織切片或其他標(biāo)本中抗原的定位。另一類稱為免疫測定(immunoassay)，用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的測定。

　　免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic technique) 最早應(yīng)用的免疫酶技術(shù)是免疫酶組織化學(xué)染色，即用標(biāo)記的抗體與標(biāo)本中的抗原發(fā)生特異性結(jié)合，當(dāng)加入酶的底物時(shí)，在酶的作用下經(jīng)一系列生化反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)，借助光鏡作出定位判斷。目前，應(yīng)用最廣泛的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)。該法特異性強(qiáng)，敏感性高，既可檢測抗體，又能測定可溶性抗原。主要方法及操作要領(lǐng)見，除了圖示的兩種方法外，還有抗原競爭法，現(xiàn)較少應(yīng)用。ELISA常采用的酶為辣根過氧化物酶(hosradish peroxidase，HRP)，其底物是二氨基苯胺(DAB)，底物被分解則呈棕褐色，可目測或借助酶標(biāo)儀比色。ELISA為非均相免疫測定，另外還有均相法，在此不作介紹。

　　由于酶免疫測定無需特殊儀器和試劑，且操作簡便，利于普及。因此，在免疫標(biāo)記技術(shù)中，該法應(yīng)用最為廣泛，并在原有方法基礎(chǔ)上加以改良，使得眾多新的，更敏感的方法應(yīng)運(yùn)而生。①生物素-親和素放大系統(tǒng)(biotin-avidin system，BAS)，建立于70年代后期，通過將酶標(biāo)記在生物素或親和素上，借助生物素與親和素的高度親力和生物素能與抗體結(jié)合的特點(diǎn)應(yīng)用于ELISA，顯著提高了檢測的敏感性。②雙表位ELISA(two-site ELISA)，其方法同雙抗體夾心法，只是將包被的抗體和酶標(biāo)抗體換成針對兩個(gè)不同抗原決定簇的單抗，用于檢測單抗的親和性及表位特異性，亦可用于標(biāo)本中抗原的快速檢測，即在試驗(yàn)時(shí)可將待測抗原與酶標(biāo)單抗同時(shí)加入反應(yīng)體系，減少檢測步驟。③斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)(dot immunofiltration assay，DIFA)，其原理與ELISA相同，但以微孔膜(如硝酸纖維素膜、尼龍膜等)代替聚苯乙烯板作載體。試驗(yàn)時(shí)，將包被有抗原或抗體的微孔濾膜貼置于吸水材料上，依次滴加的標(biāo)本、酶結(jié)合物、底物，分別進(jìn)行洗滌，多余的標(biāo)本和酶標(biāo)抗體及洗滌液等可滲濾入吸水材料中，最后陽性標(biāo)本在膜上呈現(xiàn)著色斑點(diǎn)。④酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印漬法(enzyme linked immunoelectrotransferblot，ELIB)，該法將免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)與酶標(biāo)技術(shù)相結(jié)合，有利于分析和檢測更加復(fù)雜的抗原成分。ELIB分三階段進(jìn)行。第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，先將抗原分成不同的區(qū)帶(肉眼不可見)；第二階段為轉(zhuǎn)移電泳，即將凝膠上的電泳區(qū)帶經(jīng)電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上；第三階段為酶免疫定位，用特異性抗體和酶標(biāo)抗抗體作間接ELISA，結(jié)果陽性區(qū)帶呈顯色反應(yīng)。