溶血空斑形成的試驗(yàn)是檢驗(yàn)主管技師考試要求掌握的內(nèi)容,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理相關(guān)內(nèi)容供大家參考。
經(jīng)典的溶血斑試驗(yàn)用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抗體形成細(xì)胞的功能,其原理是將綿羊紅細(xì)胞(SRBC)免疫小鼠,4天后取出脾細(xì)胞,加入SRBC及補(bǔ)體,混合在溫?zé)岬沫傊芤褐?,澆在平皿?nèi)或玻片上,使成一蒲層,置37溫育。由于脾細(xì)胞內(nèi)的抗體生成細(xì)胞可釋放抗SRBC抗體,使其周圍的SRBC致敏,在補(bǔ)體參與下導(dǎo)致SRBC溶血,形成一個(gè)肉眼可見的圓形透明溶血區(qū)而成為溶血空斑(plaque)。每一個(gè)空斑表示一個(gè)抗體形成細(xì)胞,空斑大小表示抗體生成細(xì)胞產(chǎn)生抗體的多少。這種直接法所測(cè)至的細(xì)胞為IgM生成細(xì)胞,其它類型Ig由于溶血效應(yīng)較低,不能直接檢測(cè),可用間接檢測(cè)法,即在小鼠脾細(xì)胞和SRBC混合時(shí),再加抗鼠Ig抗體(如兔抗鼠Ig),使抗體生成細(xì)胞所產(chǎn)生的IgG或IgA與抗Ig抗體結(jié)合成復(fù)合物,此時(shí)能活化補(bǔ)體導(dǎo)致溶血,稱間接空斑試驗(yàn)。
但是上述直接和間接空斑形成試驗(yàn)都只能檢測(cè)抗紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生細(xì)胞,而且需要事先免疫,難以檢測(cè)人類的抗體產(chǎn)生情況。如果用一定方法將SRBC用其它抗原包被,則可檢查與該抗原相應(yīng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞,這種非紅細(xì)胞抗體溶血空斑試驗(yàn)稱為空斑形成試驗(yàn),它的應(yīng)用范圍較大。
現(xiàn)在常用的為SPA-SRBC溶血空斑試驗(yàn)。SPA能與人及多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc段呈非特異性結(jié)合,利用這一特征,首先將SPA包被SRBC,然后進(jìn)行溶血空斑測(cè)定,可提高敏感度和應(yīng)用范圍。在該測(cè)試系統(tǒng)中,加入抗人Ig抗體,可與受檢細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白結(jié)合形成復(fù)合物,復(fù)合物上的Fc段可與連接在SRBC上的SPA結(jié)合,同時(shí)激活補(bǔ)體,使SRBC溶解形成空斑。此法可用于檢測(cè)人類外周血中的IgG產(chǎn)生細(xì)胞,與抗體的特異性無關(guān)。用抗IgA、IgG或IgM抗體包被SRBC,可測(cè)定相應(yīng)免疫球蛋白的產(chǎn)生細(xì)胞,這種試驗(yàn)稱為反相空斑形成試驗(yàn)。
溶血空斑形成試驗(yàn)可用于測(cè)定藥物和手術(shù)等因素對(duì)體液免疫功能的影響,或評(píng)價(jià)免疫治療或免疫重建后機(jī)體產(chǎn)生抗體的功能。
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