
凝血因子的檢測現在可以實現的有血漿纖維蛋白原(FIB)含量測定、血漿因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性測定、血漿因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ的促凝活性測定、血漿因子ⅩⅢ定性試驗和血漿因子ⅩⅢ亞基抗原測定。
1.血漿纖維蛋白原(FIB)含量測定
?。?)原理:FIB檢測有凝血酶凝固法(Clauss法)、比濁法(PT衍生法)以及免疫學方法等。Clauss法:以凝血酶作用于待測血漿中的FIB,使其轉變?yōu)槔w維蛋白,血漿凝固。血漿中FIB的含量與凝固時間成負相關,檢測結果與參比血漿制成的標準曲線對比可得出纖維蛋白原的含量。PT衍生法:當PT測定完成時,纖維蛋白原轉變?yōu)槔w維蛋白,其形成的濁度與FIB的含量成正比,因此無需另加任何試劑,即可由產生的濁度,用終點法或速率法算出FIB含量。免疫學方法是利用抗FIB多克隆抗體與FIB特異性結合反應進行測定。方法有免疫濁度、單向免疫擴散和ELISA等。
?。?)參考范圍:2~4g/L。
?。?)臨床意義:增高見于糖尿病、急性心肌梗死、急性傳染病、結締組織病、急性腎炎、多發(fā)性骨髓瘤、休克、大手術后、妊高征、急性感染、惡性腫瘤和應急狀態(tài)等。降低:先天性低或無FIB血癥、遺傳性FIB異常、DIC、原發(fā)性纖溶癥、重癥肝炎和肝硬化等。
?。?)方法學評價:Clauss法和PT衍生法:測定的是纖維蛋白原的功能,由于FIB的異質性,當FDP增高時,Clauss法測定結果會受到影響;免疫學方法測定的是纖維蛋白原的含量,但此法特異性不強,因為這些方法所針對的抗原決定簇也存在于纖維蛋白單體、FDPs和異常FIB中。
2.血漿因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性測定
?。?)原理:一期法:將待測血漿分別與乏FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ基質血漿混合,進行APTT測定。將正常人混合血漿與乏因子血漿混合,測定APTT,作出標準曲線。從各自的標準曲線中分別計算出受檢血漿中FⅧ:C、FⅨ:C、FⅪ:C和FⅫ:C相當于正常人的百分率(%)。
(2)參考值:FⅧ:C 103%±25.7%;FⅨ:C 98.1%士30.4%;FⅪ:C 100%士18.4%;FⅫ:C 92.4%士20.7%。
?。?)臨床意義
1)增高:主要見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病,如靜脈血栓形成、肺栓塞、妊高征、晚期妊娠、口服避孕藥、腎病綜合征、惡性腫瘤等。
2)減低:FⅧ:C減低見于血友病A、血管性血友病、血中存在因子Ⅷ抗體、DIC;FⅨ:C減低見于血友病B、肝臟病、維生素K缺乏癥、DIC、口服抗凝藥物;FⅪ:C減低見于因子Ⅺ缺乏癥、肝臟疾病、DIC等;FⅫ:C減低見于先天性因子Ⅻ缺乏癥、肝臟疾病、DIC和某些血栓性疾病等。
?。?)注意事項
1)FⅧ:C在急性時相反應時可明顯升高,在嚴重肝實質損傷時,FⅧ:C可明顯升高。FⅧ:C減低時,需與vWF含量同時測定,以篩選出vWF缺陷的可能。
2)目前認為,凝血因子促凝活性測定不必等待逐級篩選和糾正試驗的結果,可以在單純APTT延長時檢測。
3)受檢標本檢測凝固時間不在標準曲線范圍可稀釋后檢測。
3.血漿因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ的促凝活性測定
?。?)原理:將待測血漿分別與乏FⅡ、FⅤ、FⅦ和FⅩ基質血漿混合,進行PT測定。將正常人混合血漿與乏因子血漿混合,測定PT,作出標準曲線。從各自的標準曲線中分別計算出受檢血漿中FⅡ:C、FⅤ:C、FⅦ:C和FⅩ:C相當于正常人的百分率(%)。
?。?)參考值:FⅡ:C:97.7%±16.7%;FⅤ:C:102.4%±30.9%;FⅦ:C:100%±l7.3%;和FⅩ:C:103%±l9. 0% 。
?。?)臨床意義
1)增高:見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。
2)減低:見于維生素K缺乏癥(FⅤ除外)、肝臟疾病、DIC、口服抗凝劑和血中存在相應的抑制物,先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ缺乏癥較罕見。目前因子FⅡ:C、FⅤ:C、FⅦ:C和FⅩ:C的測定主要用于肝臟受損的檢查,因子Ⅶ:C在肝臟早期可下降,因子Ⅴ的測定在肝損傷和肝移植中應用較多。
4.血漿因子ⅩⅢ定性試驗
?。?)原理:在鈣離子作用下,因子ⅩⅢ能使溶解于尿素溶液的可溶性纖維蛋白單體聚合物變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白。因此,含因子ⅩⅢ的血漿鈣化凝固后不再溶于尿素溶液中,而缺乏ⅩⅢ的血漿則聚合物可溶于5mol/L尿素溶液中。
(2)參考范圍:24h內纖維蛋白凝塊不溶解。
?。?)臨床意義:本試驗簡單、可靠,是十分有用的過篩試驗。在臨床上若發(fā)現傷口愈合緩慢、滲血不斷或懷疑有因子ⅩⅢ缺陷者,可首選本試驗。若纖維蛋白在24h內,尤其是2h內完全溶解,表示因子ⅩⅢ缺乏,見于先天性因子ⅩⅢ缺乏或獲得性因子ⅩⅢ缺乏,后者見于肝臟疾病、SLE、類風濕關節(jié)炎、惡性淋巴瘤、轉移性肝癌、DIC、原發(fā)性纖溶等。
5.血漿因子ⅩⅢ亞基抗原測定
(1)原理:凝血因子ⅩⅢ由兩個亞基α和β構成。檢測方法—免疫火箭電泳法:在含有FⅩⅢα亞基和β亞基抗血清的瓊脂凝膠板中,加入受檢血漿(抗原),在電場作用下,出現抗原-抗體反應形成的火箭樣沉淀峰,此峰的高度與受檢血漿中FⅩⅢ亞基的濃度成正比。根據沉淀峰的高度,從標準曲線中計算出FⅩⅢα:Ag和FⅩⅢβ:Ag相當于正常人的百分率。
?。?)參考范圍:FⅩⅢα:Ag 100.4±12.9%,FⅩⅢβ:Ag 98.8±12.5%。
?。?)臨床意義:同上。