一、移植物選擇標(biāo)準(zhǔn)

　　移植物選擇是移植能否成功的關(guān)鍵因素之一，選擇的標(biāo)準(zhǔn)可歸納為以下幾類：

　　1.一般情況①移植物本身必須是健康細(xì)胞、組織或器官，在形態(tài)和功能上都沒有異常發(fā)現(xiàn)；②供者無傳染?。ㄓ绕涫?a href="http://www.genyda.com/jibing/aizibing/" target="_blank" title="艾滋病" class="hotLink">艾滋病和肝炎等）或相關(guān)感染、無代謝病和惡性腫瘤（原發(fā)性腦腫瘤除外），全身重要器官的功能正常；③供者與受者的年齡應(yīng)相仿，尤其供者應(yīng)小于受者；但在生命器官移植時，供者年齡最好在10～50歲之間；④供者器官與受區(qū)的大小應(yīng)相接近，尤在心、肝、肺等原位移植中，供者與受者體重相差不能過于懸殊，否則就植入困難或者不適應(yīng)。

　　2.ABO血型相容一般臨床輸血的ABO選配原則也適用于移植，O型受者只接受O型移植物；A型受者接受A型或O型；B型受者接受B型或O型；AB型受者接受范圍較廣。一般情況下，不管是活體移植物還是尸體移植物，血型不相容就不應(yīng)該進行移植。

　　3.HLA相容性供者與受者之間HLA相同的位點越多，相容性就越好，長期存活的可能性就越大。但是臨床移植的絕大多數(shù)是同種移植，在非直系血緣關(guān)系的人群中，幾乎不可能發(fā)現(xiàn)HLA完全相同者；只要能發(fā)現(xiàn)1～2個HLA位點相同，就比HLA完全不相同者之間的移植成功率大得多。如果有可能，移植物的供者最好是近親（例如父母、子女或同胞兄弟姊妹等）的健康志愿者，這樣可以在移植前對雙方較全面的檢測和交叉配合試驗，還可能有選擇的余地。如果等待尸體器官，檢測HLA的困難性增加，選擇的機會也少。移植中心的建立可以解決好多難題。

　　二、HLA血清學(xué)定型試驗

　　HLA-A、B、C、DR或DQ位點的抗原可用血清方法進行檢測，所以稱為SD抗原（serologicallydefinedantigen），其檢測方法目前普遍采用補體依賴的細(xì)胞毒（complementdependentcytotoxicyty，CDC）試驗。

　　1.試驗方法美國國家衛(wèi)生研究院（NIH）的標(biāo)準(zhǔn)方法如下：將一系列已知特異性的標(biāo)準(zhǔn)分型血清（1μl/孔）按設(shè)計好的方案加到72孔或60孔專用反應(yīng)板中（如暫時不用可以冰凍保存）；加入待檢淋巴細(xì)胞2000個/1μl/孔，置室溫30min讓抗體與抗原結(jié)合；加入補體（多為家兔混合血清）5μl，置室溫60min；每孔加入5％伊紅2～3μl，使死細(xì)胞著色；3～5min后每孔加12％福爾馬林8μl固定細(xì)胞；待細(xì)胞全部沉淀后用相差顯微鏡或倒置顯微鏡觀察結(jié)果。某孔的著色細(xì)胞超過50個即為陽性反應(yīng)，說明被檢細(xì)胞的HLA型與該孔所加抗體的相一致；否則為不一致。

　　2.細(xì)胞分離檢測活體可取外周血直接分離；檢測尸體時取淋巴結(jié)，制成單個細(xì)胞并洗滌后再分離。檢測HLAⅠ類抗原時取單個核細(xì)胞層的細(xì)胞即可應(yīng)用，因為該層細(xì)胞都表達(dá)Ⅰ類抗原；但檢測HLA-DR和DQ等Ⅱ類抗原時，就需要進一步分離較純的B細(xì)胞（純度達(dá)80％以上），因為Ⅱ類抗原不分布在T細(xì)胞上。

　　3.分型血清試驗用的標(biāo)準(zhǔn)抗血清必須從經(jīng)產(chǎn)婦（尤其多產(chǎn)婦）的血清中篩選，胎盤液或其他體液也可應(yīng)用；也可通過人工免疫獻(xiàn)血員的方法得到。篩選的方法也用CDC試驗，只是將已知與待檢互換。Ⅱ類抗血清篩選后還必須用混合血小板將其中可能含有的Ⅰ類抗體吸收去，因試驗用的B細(xì)胞上也有Ⅰ類抗原。許多人嘗試過抗HLA的單克隆抗體，但是多不成功，因鼠源性抗體主要是針對人類的公共抗原而非某個體的HLA私有抗原；還有一個原因是鼠源性抗體多不能固定補體，不能用細(xì)胞毒方法進行檢測。

　　4.HLA定型板某些專門實驗室將HLA定型血清預(yù)先加到專用的反應(yīng)板上冰凍保存，可供自己或出售給他人使用，試驗時只須加入待檢細(xì)胞及其它試劑即可。定型板中抗血清的種類要覆蓋本民族或本地區(qū)80％以上的抗原，其中高頻抗原每種抗血清3份以上，低頻抗原每種抗血清2份以上。定型血清板須經(jīng)幾個實驗室認(rèn)可或有關(guān)部門核準(zhǔn)后才能銷售和使用；現(xiàn)在國內(nèi)所做的定型板多限于HLAⅠ類抗原的檢測。

　　三、HLA細(xì)胞法分型試驗

　　HLA-D和DP位點的抗原須用細(xì)胞法分型進行鑒定，所以又稱LD抗原（lymphocytedefinedantigen），其鑒定方法普遍采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixedlymphocyteculture，MLC），也稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixedlymphocytereaction，MLR）。

　　1.試驗方法將分離的反應(yīng)細(xì)胞（通常是患者的淋巴細(xì)胞）與刺激細(xì)胞（通常是供者或已知的標(biāo)準(zhǔn)淋巴細(xì)胞）配制成1×106/ml濃度的懸液，各加0.2ml到反應(yīng)管中；放置37℃和5％CO2環(huán)境下培養(yǎng)5～6天。培養(yǎng)結(jié)束后進行涂片染色，觀察并計數(shù)轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞；也可在培養(yǎng)結(jié)束前5～12小時加入3H-TdR，收獲后用液體閃爍儀計數(shù)細(xì)胞的放射性。試驗結(jié)果的常用表示方式是刺激指數(shù)（SI）。

　　MLC分為雙向法和單向法。雙向MLC是反應(yīng)管中兩種細(xì)胞都有應(yīng)答能力，可以互為刺激細(xì)胞和反應(yīng)細(xì)胞，試驗結(jié)果是兩種細(xì)胞反應(yīng)之和。

　　SI＝2×試驗管cpm/（A對照cpm＋B對照cpm）

　　雙向MLC只能反映兩種細(xì)胞間LD的差別，結(jié)果比較模糊，也不能做LD抗原的分型。單向MLC是將刺激細(xì)胞用絲裂霉素C（mitomycinC）或X線照射先行滅活，但細(xì)胞的抗原性保持不變，因此可作為刺激細(xì)胞而不能作為反應(yīng)細(xì)胞，試驗結(jié)果是待檢測細(xì)胞的反應(yīng)，使于結(jié)果分析。

　　SI＝試驗管cpm/自身對照cpm

　　單向MLC可以用來進行HLD-D和DP位點的分型試驗，常用的方法有兩類：純合子分型細(xì)胞（homozygoustypingcell，HTC）試驗和預(yù)敏淋巴細(xì)胞分型（primedlymphocytetyping，PLT）試驗。

　　2.HTC試驗HTC是指細(xì)胞內(nèi)一對同源染色體上兩個HLA單倍型完全相同，所以該位點在細(xì)胞表面只表達(dá)一種抗原；HTC可從近親婚配的子代表中尋找。將一組HTC經(jīng)處理來活后作為刺激細(xì)胞，與待檢細(xì)胞做單向MLC.如果待檢細(xì)胞與刺激細(xì)胞的LD不同，就會發(fā)生反應(yīng)；如果相同便不反應(yīng)；所以試驗又稱為陰性分型法。當(dāng)SI≤2時可認(rèn)為待檢細(xì)胞與該管HTC的LD抗原相同。本法的缺點是HTC難以得到，而且培養(yǎng)時間長（5～6天），在尸體器官移植時不能應(yīng)用。

　　3.PLT試驗本方法需事先準(zhǔn)備分型細(xì)胞：選擇只有一個單倍型相同的兩個體a/b和a/c（這在雙親與子女之間不難做到），取前者的淋巴細(xì)胞處理后作刺激細(xì)胞，取后者的淋巴細(xì)胞作反應(yīng)細(xì)胞；將兩者進行單向混合培養(yǎng)，至第10天使可得到針對b單倍型有特異性免疫應(yīng)答能力的預(yù)致敏分型細(xì)胞（PTL）。依此類推，可以制備出一系列能識別各種已知LD抗原的一套PTL；這些處于休止?fàn)顟B(tài)的致敏記憶細(xì)胞可在液氮中長期保存?zhèn)溆谩?/p>

　　進行PLT試驗時，需將待檢淋巴細(xì)胞處理成刺激細(xì)胞，而PTL為反應(yīng)細(xì)胞；如果待檢細(xì)胞的LD抗原與PTL預(yù)先識別的特異性相同，則PTL會迅速出現(xiàn)反應(yīng)（二次應(yīng)答），如不同則不出現(xiàn)快速反應(yīng)，所以本法又稱為陽性分型法。PLT法克服了HTC法試驗周期長的缺點，在24小時內(nèi)即可報出結(jié)果；PTL比HTC容易得到，但真正做起來也復(fù)雜。

　　不管是CDC試驗還是MIC方法，都必須以受檢者的淋巴細(xì)胞作為檢測標(biāo)本，這就大大地限制了檢測方法的應(yīng)用范圍；而且還存在抗體來源困難、細(xì)胞培養(yǎng)周期過長等缺點；所以近年來將分子生物學(xué)技術(shù)引入了HLA檢測的領(lǐng)域，產(chǎn)生了DNA分型法。DNA分型法是利用PCR技術(shù)將標(biāo)本中的少量目的DNA大量擴增，然后再進行產(chǎn)物鑒定的方法（原理和步驟在此不予討論），特點是靈敏度高，試劑來源容易，應(yīng)用范圍廣，陳舊的或微量的標(biāo)本都可進行檢測，在移植醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)和其他方面都有廣闊的前途。

　　四、交叉配合試驗

　　傳統(tǒng)的交叉配合（crossmatching）試驗是檢測受者體內(nèi)是否存在抗供者的特異性抗體，現(xiàn)在可同時檢測受者對供者LD抗原的相容程度。不管是否已經(jīng)進行過各種HLA分型試驗，交叉配合試驗對選擇移植物都有一定的參考價值。

　　1.微量細(xì)胞毒試驗用供者的淋巴細(xì)胞作靶細(xì)胞，與受者的血清進行CDC；出現(xiàn)陽性反應(yīng)說明受者體內(nèi)含有抗供者的特異性抗體，移植后很有可能發(fā)生超急排斥反應(yīng)。若要明確受者的抗體是抗Ⅰ類抗原還是抗Ⅱ類抗原，可以將供者的淋巴細(xì)胞進一步分離出較純的T細(xì)胞和B細(xì)胞分別進行檢測；若要排除患者自身抗體的影響，可以用患者自己的細(xì)胞與自已的血清進行試驗作為對照。

　　交叉配合是移值前必須做的一個檢驗項目；對一些曾經(jīng)接觸過移植抗原的受者，例如多次接受輸血者、經(jīng)產(chǎn)婦、有不成功移植史或接受過血清透析治療者，尤其要進行審慎的檢驗。

　　2.流式細(xì)胞儀檢測將供者淋巴細(xì)胞與受者血清共育后，用熒光標(biāo)記的抗人Ig對結(jié)合有抗體的細(xì)胞染色，在流式細(xì)胞儀上進行熒光標(biāo)記測定。該法比微量細(xì)胞毒法的靈敏度高100倍，有條件的單位可以優(yōu)先考慮使用。

　　3.混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)將供者與受者的淋巴細(xì)胞做雙向混合培養(yǎng)，或者滅活供者的淋巴細(xì)胞做向混合培養(yǎng)，細(xì)胞反應(yīng)的程度與供－受者相容的程度呈負(fù)相關(guān)。

　　4.細(xì)胞介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞毒試驗檢測受者對移植物可能發(fā)生的細(xì)胞介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞毒作用（cell-mediatedlymphocytotoxicity，CML）。將受者淋巴細(xì)胞與滅活的供者淋巴細(xì)胞做常規(guī)單向MLC，收獲致敏的受者淋巴細(xì)胞后，再與51Cr標(biāo)記的、PHA刺激的供者淋巴細(xì)胞做CML試驗；51Cr釋放的程度與供－受者相容程度呈負(fù)相關(guān)。