
顯微鑒別系指用顯微鏡對(duì)藥材的切片、粉末、解離組織或表面制片及成方制劑中藥味的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方法。
鑒別時(shí)選擇有代表性的樣品,根據(jù)各該藥材鑒別項(xiàng)的規(guī)定制片。成方制劑根據(jù)不同劑型適當(dāng)處理后制片。
一、橫切片或縱切片:選取藥材適當(dāng)部位,軟化后用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它試液處理后觀察。必要時(shí)可包埋后切片。[醫(yī) 學(xué)教育網(wǎng) 搜集 整理]
二、粉末制片:取粉末少量,置載玻片上,攤平,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它適當(dāng)試液處理后觀察。
三、表面制片:將樣品濕潤(rùn)軟化后,切取一部分或撕取其表皮,加適宜的試液觀察。
四、解離組織片:如樣品中薄壁組織占大部分,木化組織少或分散存在,可用氫氧化鉀法;如果品堅(jiān)硬,木化組織較多或集成較大群束,可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在解離前,應(yīng)先將樣品切成寬或厚約2mm的小條或片。
1.氫氧化鉀法
置樣品于試管中,加5%氫氧化鉀溶液適量,加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去堿液,加水洗滌后,取出少量置載玻片上,用解剖針?biāo)洪_,以稀甘油裝置觀察。
2.硝鉻酸法
置樣品于試管中,加硝鉻酸試液適量,放置,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌后,照1.法操作裝置。
3.氯酸鉀法
置樣品于試管中,加硝酸溶液(1→2)及氯酸鉀少量,緩緩加熱,待產(chǎn)生的氣泡漸少時(shí),再及時(shí)加入氯酸鉀少量,以維持氣泡穩(wěn)定地發(fā)生,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌后,照1.法操作裝置。
五、花粉粒與孢子制片:取花粉、花藥(或小的花朵)或孢子囊群(干燥樣品浸于冰醋酸中軟化),用玻璃棒搗碎,過濾于離心管中,離心,取沉淀加新鮮配制的醋酐與硫酸(9∶1)的混合液1~3ml,置水浴上加熱2~3分鐘,離心,取沉淀,用水洗滌2次,加50%甘油與1%苯酚3~4滴,用品紅甘油膠封藏觀察。也可用水合氯醛試液裝置觀察。[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng) 搜集 整理]
六、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的測(cè)量:在顯微鏡下測(cè)量細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物等的大小,可用目鏡測(cè)微尺測(cè)量。先將目鏡測(cè)微尺裝入目鏡內(nèi),用鏡臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)化。標(biāo)化時(shí),轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡,移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺,使兩種量尺的刻度平行,左邊的“0” 刻度重合,再找第二條重合刻度。根據(jù)兩條重合刻度間兩種量尺的小格數(shù),計(jì)算出目鏡測(cè)微尺每小格在該物鏡條件下所相當(dāng)?shù)拇笮。é蘭)。測(cè)量時(shí),以目鏡測(cè)微尺測(cè)量目的物的小格數(shù),乘以每一小格的大?。é蘭)。通常是在高倍物鏡下進(jìn)行,但欲測(cè)量較長(zhǎng)的如纖維、非腺毛等的長(zhǎng)度時(shí),則以在低倍物鏡下測(cè)量較為方便。記錄最大值與最小值(μm),可允許有少量略高或略低于藥典規(guī)定的數(shù)值。
七、細(xì)胞壁性質(zhì)的檢定:
1.木質(zhì)化細(xì)胞壁
加間苯三酚試液1~2滴,稍放置,加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。
2.木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁
加蘇丹Ⅲ試液,稍放置或微熱,顯橘紅色至紅色。
3.纖維素細(xì)胞壁
加氯化鋅碘試液;或先加碘試液濕潤(rùn)后,稍放置,再加硫酸溶液(33→50);顯藍(lán)色或紫色。
4.硅質(zhì)化細(xì)胞壁
加硫酸無變化。
八、細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的檢定:
1.淀粉粒
(1)加碘試液,顯藍(lán)色或紫色。
?。?)用甘油醋酸試液裝置,置偏光顯微鏡下觀察,未糊化的淀粉粒顯偏光現(xiàn)象;已糊化的無偏光現(xiàn)象。