- 免費試聽
- 免費直播
12月24日 19:00-21:00
詳情12月31日 14:00-18:00
詳情1.重組dna技術概論
1.1.概念
①自然界基因轉(zhuǎn)移和重組:重組dna技術是在人們對自然界基因轉(zhuǎn)移和重組的認識基礎上創(chuàng)立的新技術。自然界基因轉(zhuǎn)移伴發(fā)重組有幾種形式:位點特異的 重組、同源重組及轉(zhuǎn)座重組。依賴整合酶、在兩個dna序列的特異位點間發(fā)生的整合稱位點特異的重組。發(fā)生在同源序列間的重組稱為同源重組,又稱基本重組醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理。
②重組dna技術:細菌的基因轉(zhuǎn)移包括接合作用、轉(zhuǎn)化作用和轉(zhuǎn)導作用等(各概念詳見課本)。在接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導或轉(zhuǎn)座過程中,不同dna分子間發(fā)生的共價連接即為重組。
克隆就是來自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。獲取同一拷貝的過程稱為克隆化,也就是無性繁殖。為研究基因的結構與功能,從構建的基因組dna文庫或cdna文庫分離、增某一感興趣的基因就是基因克隆或分子克隆,又稱重組dna技術。
1.2.基因工程基本原理一個完整的基因克隆過程應包括:目的基因的獲取,克隆基因載體的選擇與改造,目的基因與載體的連接,重組dna分子導入受體細胞,篩選出含感興趣基 因的重組dna轉(zhuǎn)化細胞。實現(xiàn)上述過程需要一些重要的工具酶,如限制性內(nèi)切核酸酶連接酶等。限制性內(nèi)切核酸酶是一類識別dna特意序列的內(nèi)切核酸酶,它的 作用特異切開雙鏈dna。
①目的基因的獲取:外源基因又稱目的基因,來源于幾種途徑:化學合成、酶促合成cdna,制備的基因組dna及pcr技術。
②基因載體的選擇與構建:可作為基因載體的dna分子有質(zhì)粒dna、噬菌體dna和病毒dna,它們經(jīng)適當改造后仍具有自我復制能力,或兼有表達外源基因的能力。
③外源基因與載體連接:連接方式有:黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。
④重組dna導入宿主細胞:外源dna與載體在體外連接成重組dna分子,需將其導入宿主細胞。隨受體細胞生長、增殖,重組dna分子得以復制、擴增。
⑤重組體的篩選:鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組dna分子確實帶有目的基因,即可得到目的基因的克隆,這一過程即為篩選或選擇。
⑥克隆基因的表達:在原核或真核表達體系中進行表達,獲得所需要的蛋白質(zhì)。
2.基因工程與醫(yī)學
(1)疾病基因的發(fā)現(xiàn):不僅可以發(fā)現(xiàn)新的遺傳疾病,而且對遺傳病的診斷和治療有著極其重要的意義。
(2)發(fā)展新藥物:利用基因工程技術生產(chǎn)了許多有藥用價值的蛋白質(zhì)和多肽。
(3)dna診斷:又稱基因診斷,是利用分子生物學及分子遺傳學的技術和原理,在dna水平上分析、鑒定遺傳性疾病所涉及的基因的置換、缺失或插入等突變。
(4)基因治療:是向功能缺陷的細胞補充相應功能的基因,以糾正或補償其基因缺陷,達到治療目的。包括體細胞基因治療和性細胞基因治療。
(5)遺傳病的防治:①產(chǎn)前診斷;②攜帶者測試基因;③癥候前診斷;④遺傳病易感性。
12月24日 19:00-21:00
詳情12月31日 14:00-18:00
詳情