1.隱丹參酮的吸收、分布、排泄和代謝：

以薄層分離和雙波長薄層色譜掃描儀分離及測定生物樣品中隱丹參酮的含量。將29只小鼠（雄性，體重22-25g，以下同），分成6組，每組3-6只動物，禁食8小時后，每鼠以隱丹參酮2mg灌胃，給藥后不同時間處死，取全胃腸道及其內(nèi)容物研成勻漿，提取測定藥物含量。在半對數(shù)紙上以藥物回收率作縱坐標(biāo)，時間為橫坐標(biāo)作圖，求得隱丹參酮在胃腸道的半量消失時間為31/3小時。另外，將藥物放入小鼠離體胃腸道內(nèi)在生理鹽水中溫孵（37℃）12小時，測定藥物回收率為98%，因此上述藥物自整體胃腸道消失的情況，基本上反映口服后藥物的吸收，另取8只小鼠禁食8小時后，灌胃隱丹參酮400mg/kg，2小時后處死，取各組織（2只動物為一個樣品）研成勻漿提取測定藥物含量，結(jié)果表明，口服后肝及肺含量較高，肺、心其次，脾、血漿及腎依次遞減。另將6只小鼠。靜脈注射隱丹參酮（以少量吐溫80及二甲基亞砜助溶）40mg/kg，5分鐘后處死，測得藥物在組織的含量，以腦、肺、心較高、肝、血漿、腎及脾依次遞減。8只大鼠（雄性，體重120-150g，以下同），禁食2小時后，每鼠灌胃隱丹參酮350mg/kg，給藥后分段收集尿液，測定藥物含量。給藥后，原形藥物自大鼠尿中排出很少，服藥24小時僅排出給藥量的0.21%，48小時共排出0.34%，另取5只大鼠禁食12小時后灌胃隱丹參酮150mg/kg，在乙醚麻醉下插膽管，并分段收集膽汁，測定藥物含量。給藥后6、12及20小時內(nèi)，原形藥自膽汁排出為給藥量的0.17%、0.48%及0.80%。說明藥物自腸道吸收后大部分在體內(nèi)。大鼠口服隱丹參酮后，尿、膽汁及腸道內(nèi)容物經(jīng)提取及薄層層離后，可得7個斑點，純化后得7個紅色或橙黃色結(jié)晶。測定其理化性質(zhì)，其中代謝物6號為未改變的隱丹參酮，7號為丹參酮ⅡA,1號極性最大，根據(jù)高分辨質(zhì)譜測定，代謝物2、3、5及6號體外抑菌試驗均為陽性，但仍以原形藥（6號）活性最強，因此在動物體內(nèi)發(fā)揮藥理作用可能仍以原形藥為主。將隱丹參酮放入離體大鼠小腸內(nèi)溫孵（37℃）5小時后，腸內(nèi)容物經(jīng)提取及薄層層離后，除有原形藥外，尚有少量丹參酮ⅡA。大鼠口服隱丹參酮后3小時內(nèi)膽汁中首先出現(xiàn)的代謝產(chǎn)物除原形藥外。也是丹參酮ⅡA，說明腸道內(nèi)或肝臟的脫氫酶可能使隱丹參酮轉(zhuǎn)化成丹參酮ⅡA。1、2、3、4及5號比隱丹參酮極性大的代謝物在大鼠口服藥物6小時以后才陸續(xù)在膽汁中出現(xiàn)，說明藥物經(jīng)過反復(fù)的肝腸循環(huán)，在肝臟由肝微粒體藥酶催化，逐漸轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的代謝產(chǎn)物。例如羥基丹參酮ⅡA可能由羥基化酶所催化，丹參酮ⅡA與谷氨酸的縮合物則可能由?；o酶A和谷氨酸2-N酰基轉(zhuǎn)移酶參與轉(zhuǎn)化。因此設(shè)想，隱丹參酮在動物體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化可能有下列途徑。

2.丹參酮的膽汁排泄與肝內(nèi)轉(zhuǎn)化：

2.1.試驗動物為大鼠，雄性、體重350-400g，10%烏拉坦1g/kg腹腔麻醉，以小兒頭皮針插入總膽管，固定后先收集1小時的膽汁作為空白對照。藥物先溶入少量二甲基甲酰胺。然后以1%羧甲基纖維素鈉水溶液稀釋至10mg/ml。由十二指腸給藥，而后按時定量收集膽汁，膽汁貯于冰箱過夜，以氯仿提取兩次，合并氯仿液，水浴蒸于，貯于干燥器，測試前以50ml氯仿定量稀釋，進(jìn)行高效液相分離并定量；丹參酮在肝勻漿內(nèi)的轉(zhuǎn)化，用體重160g雄性大鼠乙醚麻醉后，取肝臟，稱重后以0.15M氯化鉀、0.24M煙酰胺制備均漿，雙層紗布過濾，濾液再以上述溶液稀釋至每10ml相當(dāng)于肝組織6g。于100ml錐形瓶中加入PH7·4的磷酸緩沖液4ml，肝勻漿液2ml，丹參酮樣 品1mg溶于95%乙醇0.2ml中，對照組加0.2ml不含丹參酮的95%乙醇液。37℃保溫2小時，終止反應(yīng)后用氯仿12ml分二次萃取。合并萃取液。水浴蒸干。測試前以氯仿100ml溶解樣品，應(yīng)用薄層分離并定量、（硅膠一CMC薄層，展開劑為苯-丙酮（95：5）：肝內(nèi)抑菌活性成分檢出，試驗采用小鼠，給丹參酮Ⅱ-A后，經(jīng)不同間隔時間，取肝組織，無水硫酸鈉制成脫水肝粉，進(jìn)行硅膠干柱層析，分離出相應(yīng)色帶，參比物丹參酮ⅡA，切下該段色帶后以丙酮洗脫，回收丙酮后作抑菌試驗。

實驗結(jié)果表明，大鼠十二指腸給藥后一般在1小時左右即可測得膽汁中有微量的丹參酮排出，其排出高峰在給藥后3小時左右。給總丹參酮制劑組，劑量24mg其中含丹參酮ⅡA3.09mg，隱丹參酮0.6mg。該組動物排出的膽汁中含丹參酮ⅡA量較丹參酮ⅡA組高5-10倍以上。提示制劑組中的隱丹參酮有部分在肝內(nèi)可轉(zhuǎn)化為丹參酮ⅡA，此外總酮制劑組的腸吸收較單體丹參酮ⅡA的吸收為多，也可能是其中因素之一。十二指腸給予隱丹參酮后膽汁中不僅有隱丹參酮，尚出現(xiàn)丹參酮ⅡA的色譜峰。給丹參酮Ⅰ后膽汁中所排出的丹參酮Ⅰ較丹參酮ⅡA較丹參酮ⅡA及隱丹參酮略有增多，說明不同結(jié)構(gòu)的丹參酮其在肝內(nèi)的排出速度是不相等的。大鼠十二指腸給隱丹參酮后，膽汁中出現(xiàn)丹參酮ⅡA，提示隱丹參酮在肝內(nèi)可經(jīng)脫氫反應(yīng)轉(zhuǎn)化為丹參酮ⅡA。為此，采用大鼠正常肝的習(xí)漿液與隱丹參酮在37℃保溫2小時，終止反應(yīng)后以氯仿提取勻漿液，蒸于氯仿后，用50ml氯仿溶解樣品，然后在硅膠-CMC薄層上精確滴加10ml樣品，展層后圖譜上可見勻漿液中除隱丹參酮外，還形成另一產(chǎn)物，其Rf值為0.42，與濃硫酸反應(yīng)顯綠色。其紫外吸收與已知品丹參酮ⅡA完全一致。從而證明隱丹參酮在肝勻漿內(nèi)經(jīng)脫氫反應(yīng)轉(zhuǎn)化為丹參酮ⅡA。此外亦發(fā)現(xiàn)在以二氫丹參酮Ⅰ與肝勻漿保溫后，在勻漿液中形成另一產(chǎn)物與濃硫酸反應(yīng)呈蘭紫色，其Rf值與丹參酮Ⅰ相同，但生成率較低。

為了解服用丹參酮后肝內(nèi)有無抑菌活性成分，除直接由膽汁中測定其含量外，還參照前文觀察了肝膽及尿液中的抑菌活性成分，應(yīng)用分枝桿菌607為指示菌。藥物制劑分別為丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅰ及隱丹參酮，藥物均配制成油劑，劑量為2mg/只。實驗動物用體重20-25g的雄性小鼠，每組12只。于給藥后的2、4、16、30小時分別處死3只，在無菌條件下用皮膚鉆孔器切下直徑6mm的肝組織，同時收集血、尿與膽汁，分別置入事先準(zhǔn)備好的含有分枝桿菌607的瓊脂平板上，在37℃溫箱經(jīng)36-48小時，以抑菌圈達(dá)10mm以上為正反應(yīng)，結(jié)果表明：給藥后的第2小時各組動物的肝、膽、血、尿中很少出現(xiàn)抑菌物質(zhì)出現(xiàn)，其抑菌圈分別為隱丹參酮組26mm（2/3）。丹參酮ⅡA10-20mm（3/3）、丹參酮Ⅰ11mm（1/3）。且該抑菌物質(zhì)在肝內(nèi)停留時間較長于小時30肝內(nèi)仍可檢出。（分母為試驗樣品數(shù)，分子代表具有抑菌活性數(shù)）。

2.2.丹參酮ⅡA磺酸鈉：

實驗所用標(biāo)記丹參酮ⅡA磺酸鈉比活性為8.4uci/mg。小鼠體重20-22g，一次靜脈注射3uci/只。分別于給藥后1.6和24小時殺死小鼠，取出心、肝、膽囊、肺、腎、胃、腸和胃腸內(nèi)容物。稱取一定量組織（一般在20mg）左右，尿和血液吸取量不超過0.1ml過氧化氫，置于70-80℃水浴中消化30分鐘左右，然后用FJ-353雙道液體閃爍儀測定放射活性。所用閃爍液含有0.03%PPO和0.4%POPOP的二乙醇甲醚和二甲苯閃爍液。以14C正十六烷作內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)淬滅校正。各組織中的放射活性以每分鐘脈沖數(shù)（cpm）100mg濕重計算。結(jié)果表明，小鼠1次靜脈注射后l小時，組織中以肝、肺和腸為高；腎、脾、心、胃次之；腦最低。在6和24小時均趨于減少。腸內(nèi)容物的放射活性在3個不同時間均占首位，分別為注入量的8.1，52.O和32.7%。膽囊及內(nèi)容物的放射活性按每只膽囊重量計算在6和24小時，分別為注入量的12.7和1.2%。小鼠1次靜脈注射35S-丹參酮ⅡA后連續(xù)收集24，48和72小時的尿和糞，按上述方法消化，測定放射活性。停止飼食的3日內(nèi)每天灌胃50%葡萄糖溶液1ml。

在給藥后24小時內(nèi)尿中排泄率為10.2%，24-48小時和48-72小時內(nèi)分別為4.5%和1.8%，72小時內(nèi)總排泄率為16.5%。第1日內(nèi)糞中排泄率為32%。第2日和第3日內(nèi)分別為24.1%和19.6%。3日內(nèi)總排泄率為75.7%。3日內(nèi)尿和糞的總排泄率為92.2%。從上述結(jié)果可以認(rèn)為35S-丹參酮ⅡA的排泄途徑主要是由膽道排至腸內(nèi)，由糞中排出。小鼠靜脈注射35S-丹參酮Ⅱ3uci/只后2，5，10，20，30，60，90，120和240分鐘從眼后靜脈叢取血O.01ml，測定全血的放射活性，結(jié)果給藥后2分鐘血中平均放射活性為75843cpm/0.1ml血，90分鐘已降至3758cpm/0.1ml血。至240分鐘仍在低水平。小鼠靜脈注射一定量35S-丹參酮ⅡA磺酸鈉后收集24小時的尿，濃縮分離后經(jīng)薄層鑒定，表明一個是原形藥，另一個為代謝產(chǎn)物。

2.3.丹參素在生物樣品中的藥代動力學(xué)：

以醋酸乙酯為溶劑，分別掃描激發(fā)光譜與熒光發(fā)謝光譜，峰波長各為?EX285nm，?EX314nm。丹參素濃度在1.0-9.0xl0(-6）g/ml范圍內(nèi)，與熒光強度呈線性關(guān)系。相關(guān)系數(shù)r=0.9996，回歸方程C=1.0168x10-7F-1.815x1O(-7）。丹參素的醋酸乙酯提取穩(wěn)定，于3小時內(nèi)測得的熒光強度數(shù)據(jù)恒定。于血漿中，按上列丹參素濃度線性范圍的熒光強度數(shù)據(jù)表明，其直線相關(guān)關(guān)系亦屬良好，r=0.9997；回歸方程C=1.497×10(-7）F-1.470×10(-7）。分別吸取丹參素純品水溶液（0.03mg/ml）0.15-1.35ml，水稀釋至1.50ml，各加入家兔空白血漿1.0ml，稀H2SO40.5ml，用醋酸乙酯提?。?x1.5ml），于?EX285nm加血漿，稀釋至2.5ml，同法操作，作為標(biāo)準(zhǔn)，測得回收率結(jié)果平均為76.47±2.427%，變異系數(shù)CV：3.174%（n=20）。

取家兔5只，經(jīng)快速耳靜脈注射丹參素（針劑30mg/kg）后，于5、15、30、60、90、120擴(kuò)150分鐘定時抽血、取血漿，如前操作，測定血藥濃度，用空白血漿作對照。由實驗數(shù)據(jù)的均值，以丹參素濃度的對數(shù)與時間作圖，為一直線。顯示丹參素的藥素的藥代動力學(xué)為單室模型，其參數(shù)消除速率常數(shù)和生物半衰期各為：Kel=0.0456±0.0141分鐘：t1/2=16.58±5.768分鐘。