方法名稱：青霉素V鉀膠囊－青霉素V鉀－高效液相色譜法

應用范圍：該方法采用高效液相色譜法測定青霉素V鉀膠囊中青霉素V鉀的含量。

該方法適用于青霉素V鉀膠囊。

方法原理：供試品經(jīng)pH6.5磷酸鹽緩沖液溶解并定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長268nm處檢測青霉素V鉀的峰面積，計算出其含量。

試劑：1. 乙腈

2. 冰醋酸

3. pH6.5磷酸鹽緩沖液

4. 氫氧化鈉試液

儀器設備：1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按青霉素V鉀峰計算應不低于2000。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：水 乙腈 冰醋酸=65 35 1

2.2 檢測波長：268nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. pH6.5磷酸鹽緩沖液

取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液125mL，加水250mL，混勻，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH至6.5，再用水稀釋至500mL。

2. 氫氧化鈉試液

取氫氧化鈉4.3g，加水使溶解成100mL。

3. 對照品溶液的制備

精密稱取青霉素V鉀對照品約50mg，置50mL量瓶中，用pH6.5磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

4. 供試品溶液的制備

取供試品裝量差異項下的內(nèi)容物，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于青霉素V鉀50mg），置50mL量瓶中，用pH6.5磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長268nm處測定青霉素V鉀（C16H18N2O5S）的峰面積，計算出其含量。每1mg的C16H18N2O5S相當于1695青霉素V單位。

參考文獻：中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005版，二部，p.311。