由于MRSA的不均一耐藥性，給其檢測(cè)帶來(lái)一定的困難。MRSA的檢出率受孵育溫度、時(shí)間、培養(yǎng)基的pH和NaCl的濃度、菌液的數(shù)量等多種因素的影響。因此，目前還沒有一種最佳的檢測(cè)方法。

1 紙片擴(kuò)散法(K-B法)

平皿中MH瓊脂厚度為4 mm，菌液調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠞岫?，涂沫于上述平板，甲氧西林含? μg/片，35°C孵育24 h，抑菌圈≤11 mm為耐藥，≥17 mm為敏感，由于MRSA通常對(duì)其它耐酶半合成青霉素也耐藥，因此美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)推薦用苯唑西林來(lái)代替檢測(cè)MRSA。苯唑西林在貯存過程中藥效不易降低，且對(duì)不均一耐藥性檢測(cè)效果更好，所以國(guó)內(nèi)多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都采用苯唑西林，苯唑西林含量為1 μg/片，抑菌圈≤10 mm為耐藥，≥13 mm為敏感，11～12 mm為中介。質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 29213(耐藥菌株)，金黃色葡萄球菌ATCC 25923(敏感菌株)。紙片擴(kuò)散法最大優(yōu)點(diǎn)是快速、簡(jiǎn)便、價(jià)格便宜，易被檢驗(yàn)人員接受。在合適的抗生素及培養(yǎng)溫度、菌液的濃度、培養(yǎng)基厚度等條件下，檢測(cè)MRSA是可行的。但Leneastre等[9]對(duì)K-B法和特異性mec A基因DNA片段法鑒定MRSA的結(jié)果進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)在49株用K-B法鑒定為MSSA的菌株，特異性mec A基因DNA片段法鑒定卻有11株含mec A基因；59株用紙片法鑒定為典型MRSA的菌株，有10株卻沒有特異性mec A基因，這兩種方法大約有18%～20%的差異。Chipman[10]等研究也表明以mec A基因檢測(cè)法為參考方法時(shí)，紙片擴(kuò)散法的符合率為88.2%。這可能與紙片法中的瓊脂中沒有NaCl成份，一些菌株的耐藥性得不到完全表達(dá)有關(guān)。因此，為提高紙片擴(kuò)散法檢測(cè)MRSA的可靠性，最好在MH瓊脂中加入40 g/L NaCl。

2 肉湯稀釋(MIC)法

美國(guó)疾病控制中心(CDC)推薦用MH肉湯培養(yǎng)基加NaCl至20 g/L濃度，同時(shí)加入Ca,Mg離子，將苯唑西林進(jìn)行倍比稀釋，從0.125～16 μg/ml，菌濃度為104/ml，35°C孵育24 h，MIC<2 μg/ml為敏感，>4 μg/ml為耐藥，該法檢出率可達(dá)95%，但操作較繁瑣。

3 瓊脂稀釋(MIC)法

用含20 g/L NaCl的MH瓊脂將苯唑西林倍比稀釋為12個(gè)不同濃度并澆注平皿。苯唑西林量終濃度為0.125～256 μg/ml。再將菌液(0.5麥?zhǔn)蠞岫?點(diǎn)種于含藥平皿，35°C孵育24 h。該法適用于大量菌株的MRSA檢測(cè)，結(jié)果容易判斷，重復(fù)性好，但耗時(shí)，費(fèi)力。

4 瓊脂篩選法

這是1997年NCCLS推薦的MRSA的確證試驗(yàn)，即MH培養(yǎng)基加NaCl(40 g/L)加苯唑西林(6 μg/ml)，將菌液(0.5麥?zhǔn)蠞岫?點(diǎn)種或畫線35°C孵育24 h，只要平皿有菌生長(zhǎng)，即使一個(gè)菌落也是MRSA，該法敏感度為100%，常用作校正其它方法的標(biāo)準(zhǔn)，尤其適用于檢測(cè)抑菌圈直徑處于中介度的金黃色葡萄球菌。

5 濃度梯度(Etest)法

是1988年AB Biodisk公司推出，在含20 g/L NaCl的MH瓊脂平板上，貼上苯唑西林的試條，菌液調(diào)至0.5～1麥?zhǔn)蠞岫龋?5°C孵育24 h，直接讀取MIC值。MIC<2 μg/ml為敏感，>4 μg/ml為耐藥。Etest法結(jié)合了紙片擴(kuò)散法和肉湯稀釋法的優(yōu)點(diǎn)，長(zhǎng)塑料條含有連續(xù)的呈指數(shù)梯度變化的苯唑西林(0.016～256 μg/ml)，故在檢測(cè)低水平或中等程度耐藥的MRSA時(shí)結(jié)果更為準(zhǔn)確。Novak[11]等報(bào)道，用Alamar法和Etest法對(duì)127株MRSA的檢測(cè)比較，兩者結(jié)果相關(guān)較高，用Etest法檢測(cè)127株MRSA，其中93株MIC>256 μg/ml，28株在6～256 μg/ml，檢出率達(dá)96%，Etest法具有精確、可靠、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，但缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴。

6 自動(dòng)化藥敏檢測(cè)

目前有Vitek系統(tǒng)、ATB系統(tǒng)、MicroScan系統(tǒng)、Sensiter ARIS等。將菌液稀釋后注入藥敏板或孔內(nèi)，然后通過檢測(cè)菌液濁度，熒光指示劑的熒光強(qiáng)度或熒光底物的水解反應(yīng)來(lái)判讀結(jié)果。其優(yōu)點(diǎn)是快速，但有時(shí)對(duì)生長(zhǎng)緩慢或延遲表達(dá)耐藥性的MRSA，在3～4 h內(nèi)難以達(dá)到檢測(cè)水平，容易漏檢或誤報(bào)MRSA。

7 DNA探針雜交

上述的方法都是檢測(cè)MRSA耐藥表型的方法。MRSA根據(jù)其耐藥頻率可分為1、2、3、4類，其耐藥頻率為10－7、10－4、10－3以及10－1[12]。上述常規(guī)的檢測(cè)方法對(duì)于3、4類MRSA一般不存在問題，但對(duì)于低頻率的1、2類則很容易造成漏檢。因此，對(duì)于低水平耐藥或臨界水平耐藥的MRSA，應(yīng)選擇特異性高的分子生物學(xué)方法來(lái)檢測(cè)。DNA探針雜交是用特異性的mec A DNA片段經(jīng)地高辛標(biāo)記，與可疑菌株進(jìn)行雜交，有學(xué)者報(bào)告[13]，DNA探針僅與MRSA DNA雜交，與MSSA DNA無(wú)雜交帶，其特異性高于瓊脂稀釋法，敏感性高于肉湯稀釋法，而且可直接用于臨床標(biāo)本，無(wú)需先進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，但探針較貴，保存期較短。

8 PCR技術(shù)

本世紀(jì)80年代末期，國(guó)外就有人用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)來(lái)檢測(cè)PBP2a的mec A基因。它是根據(jù)金黃色葡萄球菌TK 784的mec A基因DNA序列[14]設(shè)計(jì)一引物，再裂解提取被測(cè)菌的DNA，在一定條件下進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)瓊脂糖電泳后在紫外燈下觀察有無(wú)與陽(yáng)性對(duì)照菌株(金黃色葡萄球菌ATCC29213)相同的區(qū)帶。PCR具有較高的靈敏度，只要被測(cè)菌有微量的的基因，即出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，因此常作為檢測(cè)MRSA的參考方法。陳秀樞實(shí)驗(yàn)表明[14]，金黃色葡萄球菌耐苯唑西林的耐藥水平與mec A基因有較好的相關(guān)性。MIC>4 μg/ml的22株菌均檢出mec A基因。由于PCR很靈敏，有時(shí)會(huì)因?qū)嶒?yàn)室的污染而出現(xiàn)假陽(yáng)性，為使PCR具有更高的可靠性，必須對(duì)其擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行探針雜交或測(cè)序以提高特異性[15]。而有一些耐藥基因是沉默基因，不表達(dá)mec A基因產(chǎn)物，有時(shí)會(huì)得出假耐藥結(jié)論，所以分子生物學(xué)方法并非100%的敏感和特異，加上該法前期處理操作繁瑣，且需要一定的設(shè)備，僅在可疑或特殊情況下做此試驗(yàn)。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）感染的流行概況 自從1961年英國(guó)發(fā)現(xiàn)MRSA后，在歐美及亞洲一些國(guó)家相繼報(bào)道了MRSA所致的院內(nèi)感染。從60年代后期到80年代，MRSA感染率大大增加。美國(guó)NNIS報(bào)道1975年182所醫(yī)院MRSA占金黃色葡萄球菌感染總數(shù)的2.4%，1991年上升至24.8%，其中尤以500張床以上的教學(xué)醫(yī)院和中心醫(yī)院為多，因?yàn)檫@些醫(yī)院里MRSA感染的機(jī)會(huì)較多，耐藥菌株既可由感染病人帶入醫(yī)院，也可因?yàn)E用抗生素在醫(yī)院內(nèi)產(chǎn)生[16]。歐洲1993年1417家醫(yī)院ICU分離的MRSA達(dá)60%[17]。而日本Kansai醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院MRSA的分離率1993年達(dá)到41%。國(guó)內(nèi)在70年代發(fā)現(xiàn)有MRSA，近幾年MRSA的檢出率正在逐年上升，上海1978年在200株金黃色葡萄球菌中MRSA只占5%，1988年上升至24%，1996年激增至72%[18]。天津1988年調(diào)查MRSA分離率為47%[19]，北京醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院1996年分離MRSA達(dá)58.3%[20]，山東淮坊市1996年在三家醫(yī)院的嬰兒室分離出金黃色葡萄球菌198株，其中MRSA為112株(56.5%)[21]。武漢同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附院1992年分離MRSA就達(dá)79.6%[22]。MRSA感染多發(fā)生于免疫缺陷者，大面積燒傷，大手術(shù)后患者，長(zhǎng)期住院及老年患者，MRSA極易導(dǎo)致感染的流行和暴發(fā)。MRSA傳播主要通過醫(yī)護(hù)人員的手，在患者、醫(yī)護(hù)人員、患者間播散，另外，衣物、敷料等物品可攜帶MRSA，促進(jìn)MRSA在院內(nèi)的流行，病人一旦感染或攜帶MRSA，該菌可存在于患者身上達(dá)數(shù)月之久。