根據(jù)離心原理,可設計多種離心方法,常見下列三大類型:
1.差速離心法:通過逐步增加相對離心力,使一個非均相混合液內形狀不同的大小顆粒分步沉淀。
2.密度梯度離心法:離心前,離心管內先裝入分離介質(如蔗糖、甘油等),使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質,然后加入樣品進行離心,具體又可分為:
1)速度區(qū)帶離心法。離心前,離心管內先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質,待分離樣品鋪在梯度液的頂部,離心管底部或梯度層中間,同梯度液一起離心,利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同,使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內,達到彼此分離的目的。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。
2)預制梯度等密度離心法。醫(yī)學教育|網(wǎng)搜集整理要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質,常用介質有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等,待分離樣品一般鋪在梯度液頂上,如需挾在梯度液中間或管底部,則需調節(jié)樣品液密度。離心后,不同密度的樣品顆粒到達與自身密度相等的梯度層,即達到等密度的位置而獲得分離。
3)自成梯度等密度離心法。某些密度介質經(jīng)過離心后會自成梯度,例Percoll,可迅速形成梯度,CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質先均勻混合,離心開始后,梯度介質由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度,與此同時,可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布,到達與其自身密度相等的梯度層里,即達到等密度的位置而獲得分離。
3.沉降平衡離心法:根據(jù)被分離物質的浮力密度差別進行分離,所用的介質起始密度約等于被分離物質的密度,介質在離心過程中形成密度梯度,被分離物質沉降或上浮到達與之密度相等的介質區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。