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霍亂化學檢驗方法介紹

2014-05-23 18:06 醫(yī)學教育網(wǎng)
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霍亂化學檢驗方法介紹:

(一)血液檢查

紅細胞和血紅蛋白增高,白細胞計數(shù)10~20×109/L(1萬~2萬/mm3)或更高,中性粒細胞及大單核細胞增多。血清鉀、鈉、氯化物和碳酸鹽降低,血pH下降,尿素氮增加。治療前由于細胞內(nèi)鉀離子外移,血清鉀可在正常范圍內(nèi),當酸中毒糾正后,鉀離子移入細胞內(nèi)而出現(xiàn)低鉀血癥。

(二)尿檢查

少數(shù)病人尿中可有蛋白、紅白細胞及管型。

(三)病原菌檢查

1.常規(guī)鏡檢

可見粘液和少許紅、白細胞。

2.涂片染色

取糞便或早期培養(yǎng)物涂片作革蘭染色鏡檢,可見革蘭陰性稍彎曲的弧菌。

3.懸滴檢查

將新鮮糞便作懸滴或暗視野顯微鏡檢,可見運動活潑呈穿梭狀的弧菌。醫(yī)學|教育|網(wǎng)搜集整理

4.制動試驗

取急性期病人的水樣糞便或堿性胨水增菌培養(yǎng)6小時左右的表層生長物,先作暗視野顯微鏡檢,觀察動力。如有穿梭樣運動物時,則加入01群多價血清一滴,若是群霍亂弧菌,由于抗原抗體作用,則凝集成塊,弧菌運動即停止。如加01群血清后,不能制止運動,應再用0139血清重作試驗。

5.增菌培養(yǎng)

所有懷疑霍亂患者糞便,除作顯微鏡檢外,均應作增菌培養(yǎng)。糞便留取應在使用抗菌藥物之前,且應盡快送到實驗室作培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基一般用pH8.4的堿性蛋白胨水,36~37℃培養(yǎng)6~8小時后表面能形成菌膜。此時應進一步作分離培養(yǎng),并進行動力觀察和制動試驗,這將有助于提高檢出率和早期診斷。

6.分離培養(yǎng)

常用慶大霉素瓊脂平皿或堿性瓊脂平板。前者為強選擇性培養(yǎng)基,36~37℃培養(yǎng)8~10小時霍亂弧菌即可長成小菌落。后者則需培養(yǎng)10~20小時。選擇可疑或典型菌落,應用霍亂弧菌“0”抗原的抗血清作玻片凝集試驗,若陽性即可出報告。近年來國外亦有應用霍亂毒素基因的DNA探針,作菌落雜交,可迅速鑒定出產(chǎn)毒01群霍亂弧菌。

7.PCR檢測

新近國外應用PCR技術來快速診斷霍亂。其中通過識別PCR產(chǎn)物中的霍亂弧菌毒素基因亞單位CtxA和毒素協(xié)同菌毛基因(TcpA)來區(qū)別霍亂菌株和非霍亂弧菌。然后根據(jù)TcpA基因的不同DNA序列來區(qū)別古典生物型和埃爾托生物型霍亂弧菌。4小時內(nèi)可獲結果,據(jù)稱能檢出每ml堿性蛋白胨水中10條以下霍亂弧菌。

8.鑒別試驗

古典生物型、埃爾托生物型和0139型霍亂弧菌的鑒別。

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