可溶性抗原與相應(yīng)抗體在有適量電解質(zhì)存在下,出現(xiàn)肉眼可見的沉淀現(xiàn)象,稱為沉淀反應(yīng)。參與反應(yīng)的抗原稱沉淀原(precipitinogen),抗體稱沉淀素(precipitin)。沉淀原可以是多糖、蛋白質(zhì)、類脂等,由于其體積小,相對反應(yīng)面積大,故試驗時需對抗原進(jìn)行稀釋,以避免后帶現(xiàn)象。應(yīng)用較早的沉淀反應(yīng)是環(huán)狀沉淀反應(yīng)(ring precipitaion)和絮狀沉淀反應(yīng)(flocculation precipitation),因其敏感性不高,已被淘汰。目前應(yīng)用最多的沉淀反應(yīng)是Oudin建立的凝膠(瓊脂)沉淀反應(yīng)及其派生方法。
1.單向瓊脂擴(kuò)散(simple agar diffusion) 簡稱單擴(kuò),將特異性抗體與熔化的瓊脂混合均勻,使抗體均勻分布于瓊脂,然后澆制成瓊脂板,再按一定要求打孔并加入抗原,使抗原向孔周自由擴(kuò)散,與板中的抗體形成沉淀圈。本法為定量試驗,沉淀圈的直徑與抗原濃度成正比。單擴(kuò)常用于血清中免疫球蛋白、AFP等的定量測定。
2.火箭電泳(rocket electrophoresis) 若在單向瓊脂擴(kuò)散基礎(chǔ)上,加入抗原后,將瓊脂板置電場中,使抗原置于負(fù)極即向正極定向擴(kuò)散,在與板中的抗體結(jié)合而形成錐形沉淀峰,形似火箭,故名火箭電泳。沉淀峰的高度與抗原濃度成正比。由于在電場作用下,促使帶負(fù)電荷多的抗原泳動,故火箭電泳需時短,可用于快速測定抗原含量,如在標(biāo)本中加入少量同位素標(biāo)記的抗原后,可作放射免疫自顯影,能檢出微量抗原。應(yīng)用范圍與單擴(kuò)相似。
3.雙向瓊脂擴(kuò)散(double agar diffusion) 簡稱雙擴(kuò),先制備瓊脂板,再按要求打孔并分別加入抗原和抗體,使兩者同時在瓊脂板上擴(kuò)散,若兩者對應(yīng)且比例合適,則在抗原和抗體兩孔之間形成白色沉淀線。一對相應(yīng)的抗原抗體只形成一條沉淀線,因此可根據(jù)沉淀線的數(shù)目推斷待測抗原液中有多少種抗原成分;根據(jù)沉淀線的吻合、相切或交叉形狀,可鑒定兩種抗原是完全相同、部分相同還是完全不同(圖18.4)。本法常用于定性測定抗原抗體,亦可用于判斷免疫血清的效價。
4.對流免疫電泳(counter immunoelectrophoresis) 若在雙擴(kuò)基礎(chǔ)上加電泳,將抗原孔置負(fù)極端,抗體孔置正極端。由于抗原所帶的負(fù)電荷較抗體多,且抗原分子小于抗體,在電場中能夠克服電滲的作用而由負(fù)極泳向正極;抗體卻克服不了電滲作用,從正極向負(fù)極移動,二者形成對流,并在比例適宜處形成白色沉淀線,稱為對流電泳。因抗原抗體皆作定向運(yùn)動,所以敏感性較雙擴(kuò)為高。