1.樣品的采集和處理
血清、肝素鋰抗凝血漿、汗、糞便、尿及胃腸液均可作為測定鈉鉀樣品。血清或血漿可在2~4℃或冰凍保存。鉀測定結(jié)果明顯受溶血的干擾,因為紅細胞中鉀比血漿鉀高二十幾倍,故樣品嚴格防止溶血。血漿鉀比血清低0.1~0.7mmol/L,這種差別是由于凝血過程中血小板破裂釋放鉀之故。全血未及時分離或冷藏均可使血鉀上升。采血前患者肌活動,如仰臥、握拳等,可使血鉀上升。
采集尿樣時,由于尿液易腐敗、變性,并受飲水和晝夜影響,故應(yīng)收集24小時尿進行測定,冷藏保存或加防腐劑。
2.方法學(xué)
(1)火焰光度法測定:Na+、K+測定可采用火焰光度法,火焰光度法是一種發(fā)射光譜分析法,利用火焰中激發(fā)態(tài)原子回降至基態(tài)時發(fā)射的光譜強度進行含量分析,可檢測血清、尿液、腦脊液及胸腹水的Na+和K+,該方法屬于經(jīng)典的標準參考法,優(yōu)點是結(jié)果準確可靠,廣為臨床采用。
通常采用的定量方法有標準曲線法、標準加入法和內(nèi)標準法。內(nèi)標法是標本及標準液采用加進相同濃度的內(nèi)部標準元素進行測定,一般是加入鋰內(nèi)標,測定的是鋰/鈉或鋰/鉀電流的比值,而不是單獨的鈉或鉀的電流,這樣,可減小燃氣和火焰溫度波動等因素引起的誤差,因而有較好的準確性。
?。?)化學(xué)測定法:目前Na+和K+的化學(xué)測定主要利用復(fù)環(huán)王冠化合物如穴冠醚或球冠醚,亦稱為冠醚,均為離子載體進行測定,由于大環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)有空穴,分子內(nèi)部氧原子有未共用電子對可與金屬離子結(jié)合,根據(jù)空穴大小,可選擇性結(jié)合不同直徑的金屬離子,從而可達到測出離子濃度的目的。
Cl-的化學(xué)測定法:采用Fe存在下,Hg(SCN)2與Cl-反應(yīng)生成與Cl-等當量的SCN-,再與鐵結(jié)合成Fe(SCN)的紅色化合物,進行比色,定量標本中Cl-的含量。該法測定時,血清中性因素如F、Br和I也可以起反應(yīng);其量很少,故可忽略不計。某些藥物及膽紅素均對其有影響。以上比色法均可在自動生化分析儀進行批量測定,屬臨床常用的一種方法。
?。?)離子選擇電極法(ISE法):離子選擇電極是一種電化學(xué)傳感器,其結(jié)構(gòu)中有一個對特定離子具有選擇性響應(yīng)的敏感膜,將離子活度轉(zhuǎn)換成電位信號,在一定范圍內(nèi),其電位與溶液中特定離子活度的對數(shù)呈線性關(guān)系,通過與已知離子濃度的溶液比較可求得未知溶液的離子活度,按其測定過程又分為直接測定法和間接測定法,目前大部分采用間接測定法,由于間接測定法將待測樣本稀釋后測定,所測離子活度更接近離子濃度。
ISE法具有標本用量少,快速準確,操作簡便等優(yōu)點。是目前所有方法中最為簡便準確的方法。缺點:電極具有一定壽命,使用一段時問后,電極會老化。
?。?)整合滴定法:Cl-可采用特定的整合劑滴定法進行,Molrr法:以KrCrO-4為指示劑,用AgN03滴定血清中Cl-。Sehales法:以二苯卡巴腙作指示劑,用Hg(N03)2滴定血清中Cl-。滴定法需要熟練的操作,終點要準確,盡可能排除主觀因素的干擾,否則誤差很大。
血清中過多的膽紅素、血脂及血紅蛋白(溶血)對結(jié)果干擾很大。滴定過程中易受多種因素影響、難以得到準確的結(jié)果,目前已很少應(yīng)用。
?。?)酶法:酶法測定鈉的原理是利用鈉依賴的β-半乳糖苷酶催化人工底物ONPG(鄰硝基酚β-D-吡喃半乳糖苷);分解釋放出有色產(chǎn)物鄰硝基酚,在波長420nm處測吸光度變化。
酶法測鉀的原理是利用對丙酮酸激酶的激活作用,后者催化磷酸烯醇式丙酮酸變?yōu)槿樗嵬瑫r伴有還原型輔酶Ⅰ的消耗,在波長340nm處測NADH的吸光度下降。
酶法測氯的原理是利用氯使α-淀粉酶與鈣離子結(jié)合變成有活性的形式,然后與α-和β-葡萄糖苷酶共同催化人工合成底物2-氯4-硝基苯酚-口-D麥牙庚糖苷(CNP-G7)使其水解產(chǎn)生2-氯4-硝基苯酚,此產(chǎn)物在波長405nm處有最大吸收,血氯濃度與”淀粉酶活性成正比,同時也與2-氯4-硝基苯酚的生成量成正比。酶法的優(yōu)點是不需特殊儀器,缺點是價格較貴。
鉀、鈉的測定方法有:火焰光度法、離子選擇電極法、冠醚法和酶法。
氯的測定方法有:離子選擇電極法、硫氰酸汞比色法、硝酸汞滴定法和電量分析法(庫侖滴定法)。