亞慢性毒性作用及其試驗(yàn)方法：

一、概念和試驗(yàn)?zāi)康?

（一） 概念

亞慢性毒性是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)多日接觸較大劑量的外來化合物所出現(xiàn)的中毒效應(yīng)。所謂較大劑量，是指小于急性LD50的劑量。

（二） 試驗(yàn)?zāi)康?

亞慢性毒性試驗(yàn)的目的，主要是探討亞慢性毒性的閾劑量或閾濃度和在亞慢性試驗(yàn)期間未觀察到毒效應(yīng)的劑量水平，且為慢性試驗(yàn)尋找接觸劑量及觀察指標(biāo)。

二、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)

（一） 亞慢性試驗(yàn)期限

亞慢性毒性試驗(yàn)的期限“多日”的確切天數(shù)，至今尚無完全統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)。一般認(rèn)為在環(huán)境毒理學(xué)與食品毒理學(xué)中所要求的連續(xù)接觸為3-6個(gè)月，而在工業(yè)毒理學(xué)中認(rèn)為1-3月即可。這是考慮到人類接觸大氣、水和食品污染物的持續(xù)時(shí)間一般較久，而在工業(yè)生產(chǎn)過程中接觸化合物僅限于人一生中的工作年齡階段，且每日工作不超過8小時(shí)之故。 現(xiàn)有學(xué)者主張進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物90天喂飼試驗(yàn)為亞慢性毒性試驗(yàn)，即將受試物混合物飼料或飲水中，動(dòng)物自然攝取連續(xù)90天。這是由于有研究報(bào)道認(rèn)為動(dòng)物連續(xù)接觸外來化合物3個(gè)月，其毒性效應(yīng)往往與再延長接觸時(shí)間所表現(xiàn)的毒性效應(yīng)基本相同，故不必再延長接觸期限。相應(yīng)地主張呼吸道接觸可進(jìn)行30天或90天試驗(yàn)，每天6小時(shí)，每周5天。經(jīng)皮膚試驗(yàn)進(jìn)行30天。

（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和染毒途徑

1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：亞慢性毒性作用研究一般要求選拔兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一種為嚙齒類，另一種為非嚙齒類，如大鼠和狗，以便全面了解受試物的毒性阿特征。 由于亞慢性毒性試驗(yàn)期較長，所以選擇被動(dòng)物的體重（年齡）應(yīng)較小，如小鼠應(yīng)為15g左右，大鼠100g左右。

2、染毒途徑：亞慢性毒性試驗(yàn)接觸外來化合物途徑的選擇，應(yīng)考慮兩點(diǎn)：

一是盡量模擬人類在環(huán)境中接觸該化合物的途徑或方式，

二是應(yīng)與預(yù)期進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)的接觸途徑相一致。具體接觸途徑主要有經(jīng)口、經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮膚三種。

（三）劑量選擇與劑量分組

亞慢性試驗(yàn)的上限劑量，需控制在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸受試化合物的整個(gè)過程中，不發(fā)生死亡或僅有個(gè)別動(dòng)物死亡，但有明顯的中毒效應(yīng)，或靶器官出現(xiàn)典型的損傷。此劑量的確定可參考兩個(gè)數(shù)值，一是以急性毒性的閾劑量為亞慢性試驗(yàn)的最高劑量；一是以此化合物L(fēng)D50的1/20-1/5為最高劑量。 化合物亞慢性毒性試驗(yàn)應(yīng)求出其劑量-反應(yīng)關(guān)系，只有求出劑量-反應(yīng)關(guān)系才能闡明受試化合物的亞慢性毒作用特征，并為慢性毒性試驗(yàn)打下基礎(chǔ)。為此，亞慢性試驗(yàn)至少應(yīng)設(shè)計(jì)三個(gè)染毒劑量組及一個(gè)正常動(dòng)物對(duì)照組，必要時(shí)再加一個(gè)受試化合物的溶劑對(duì)照組。最低劑量組的劑量應(yīng)相當(dāng)于亞慢性的閾劑量水平或未觀察到作用水平，中間劑量組動(dòng)物以出現(xiàn)輕微中毒效應(yīng)為度。組內(nèi)動(dòng)物個(gè)體體重相差應(yīng)不超過平均體重的10%，組間平均體重相差不超過5%.小動(dòng)物每組不應(yīng)少于20只，大動(dòng)物不少于6-8只。

（四）觀察指標(biāo)

1、一般性指標(biāo)

1）一般綜合性觀察指標(biāo)這類指標(biāo)是非特異性觀察指標(biāo)，它是外來化合物對(duì)機(jī)體毒性作用的綜合性總體反映。

①動(dòng)物體重實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在亞慢性方式接觸外來化合物過程中，有多種因素均可影響動(dòng)物體重的增長，包括食欲變化、消化功能變化、代謝和能量消耗變化等。體重變化的表示方式，可將接觸組與對(duì)照組同期體重絕對(duì)增長的重量加以比較和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。也可將接觸組與對(duì)照組同期體重百分增長率（以接觸化合物開始時(shí)動(dòng)物體重為100%）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和比較。

②食物利用率亞慢性試驗(yàn)期間必須注意觀察并記錄動(dòng)物的飲食情況醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)編輯整理，在此基礎(chǔ)上計(jì)算食物利用率，即動(dòng)物每食入100g飼料所增長的體重克數(shù)。分析比較接觸組與對(duì)照組食物利用率，有助于分析受試化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物學(xué)效應(yīng)。

③癥狀實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在接觸外來化合物過程中所出現(xiàn)的中毒癥狀及出現(xiàn)各癥狀的先后次序、時(shí)間均應(yīng)記錄和分析。

④臟器系數(shù)或稱臟/體比值，是指某個(gè)臟器的濕重與單位體重的比值，通常以100g體重計(jì)。如肝/體比，即（全肝濕重/體重）′100.此指標(biāo)的意義是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在不同年齡期，其各臟器與體重之間重量比值有一定規(guī)律；若受試化合物使某個(gè)臟器受到損害，則此比值就會(huì)發(fā)生改變，可以增大或縮小，因此，臟/體比值是一個(gè)靈敏、有效和經(jīng)濟(jì)的指標(biāo)。

2）一般化驗(yàn)指標(biāo)主要指血象和肝、腎功能的檢測(cè)，在亞慢性試驗(yàn)中研究外來化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毒性作用，使用這類指標(biāo)，一般為篩檢性和探討性。通常血象檢測(cè)包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類、血紅蛋白定量等。肝、腎功能也是一種常規(guī)指標(biāo)，如SGOT、SGPT、血清尿素氮、尿蛋白定性或定量、尿沉渣鏡檢等。

2、病理學(xué)檢查亞慢毒性試驗(yàn)中應(yīng)重視病理學(xué)檢查。凡是在染毒過程中死亡的動(dòng)物均應(yīng)及時(shí)解剖，肉眼檢查后再進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。必要時(shí)作組織化學(xué)或電鏡鏡檢。