淋巴細胞的分離|檢測技術(shù)概述：

1.免疫熒光法

常用間接法檢查淋巴細胞表面標志，鑒定細胞的群、亞群。如CD3+、CD4+、CD8+、mIg等。

2.流式細胞術(shù)

是借助流式細胞儀對免疫細胞進行快速準確鑒定和分類的技術(shù)。

3.磁珠分離法

磁珠分離法是利用免疫磁珠進行分離細胞的方法。免疫磁珠（IMB）是特異性抗體與磁性微粒的交聯(lián)物。IMB可通過磁珠上的特異性抗體識別并結(jié)合表達相應膜抗原的細胞。應用磁場，可分離結(jié)合IMB的細胞。如采用抗CD3特異性抗體IMB可分離T淋巴細胞醫(yī)學教育網(wǎng)`搜集整理。

4.T細胞的功能測定技術(shù)

（1）T淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗：在體外培養(yǎng)的條件下，人T淋巴細胞受特異性抗原（如結(jié)核菌素）或非特異性有絲分裂原如植物血凝素（PHA）的刺激后可發(fā)生增生，轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞。以3H-胸腺嘧啶參人試驗可測定淋巴細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的程度。細胞免疫功能低下的人，T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率降低。刀豆蛋白A（ConA）是小鼠T細胞的非特異性有絲分裂原。

（2）混合淋巴細胞培養(yǎng)：器官移植前應取受體與供體的淋巴細胞進行混合淋巴細胞培養(yǎng)試驗以挑選合適的供體。混合淋巴細胞培養(yǎng)分雙向法和單向法。

雙向法：將兩個人體的淋巴細胞混合在一起培養(yǎng)，若二者的HLA分子不同，兩個來源的淋巴細胞都會受到刺激而發(fā)生轉(zhuǎn)化。根據(jù)轉(zhuǎn)化的程度可判定兩個個體淋巴細胞HLA分子的相異的程度。單卵雙生子間的淋巴細胞混合培養(yǎng)后不發(fā)生轉(zhuǎn)化。

單向法：將一個個體的淋巴細胞用絲裂霉素或放射處理使之失去自身的轉(zhuǎn)化能力，但保留著抗原性。用這種淋巴細胞的未經(jīng)處理的另一個個體的淋巴細胞混合培養(yǎng)。根據(jù)未經(jīng)處理的淋巴細胞的轉(zhuǎn)化程度來判定兩個個體淋巴細胞HLA分子的相差的程度?；旌狭馨图毎囵B(yǎng)實驗中，T淋巴細胞和B淋巴細胞均可發(fā)生轉(zhuǎn)化。

（3）遲發(fā)超敏反應皮試：將已知量的抗原（如結(jié)核菌純化蛋白衍生物）注射入前臂皮內(nèi)，24～48小時后測定硬結(jié)大小，硬結(jié)直徑大于10mm即被視為陽性。皮試陰性的人，可能有細胞免疫功能低下也可能未接觸過相應的抗原。

（4）細胞介導的細胞毒試驗：用效應性CTL和51Cr標記的靶細胞相互作用。被殺傷的靶細胞可釋放51Cro測定靶細胞釋放的51Cr產(chǎn)生的放射性，就可判定效應細胞應性CTL的細胞毒活性。用類似的方法也可測定NK細胞的細胞毒活性。

5.B淋巴細胞功能的檢測

（1）B淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗：將人淋巴細胞和不溶性的金黃葡萄球菌（B淋巴細胞分裂原）一起培養(yǎng)，以3H-胸腺嘧啶參入試驗可測定發(fā)生B淋巴細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的程度。細菌脂多糖是小鼠的B細胞分裂原。

（2）抗體生成細胞的測定：常用溶血空斑試驗。在此實驗中，抗體生成細胞分泌的Ig與綿羊紅細胞（SRBC）表面的抗原結(jié)合，在補體參與下出現(xiàn)溶血反應。方法是將吸附有已知抗原的SRBC、待檢的B細胞、補體及適量瓊脂糖液混合，傾注平皿，溫育1～3小時后，肉眼可見分散的溶血空斑，每一空斑中央含一個抗體形成細胞，空斑數(shù)目即為抗體形成細胞數(shù)。